上海晶安J06001免疫组化6孔板圆形细胞爬片24mm

兔膀胱平滑肌细胞的分离、培养和鉴定

不出现气泡，以免损伤细胞。细胞进行计数后，按照1X105~106密度将细胞接种于培养瓶中。4、培养细胞的观察及鉴定采用倒置显微镜观察平滑肌细胞的形态及生长情况。细胞爬片HE染色观察细胞形态。电镜检查。免疫组化染色检测α-actin。结果两只兔所有标本均获成功。倒置显微镜观察平滑肌细胞24小时均可见膀胱平滑肌细胞贴壁生长，正常兔7天左右、而梗阻兔则需10~12天可于50毫升培养瓶约80%汇合。均传代顺利，传代后约正常兔6天左右、而梗阻兔需8~9天可于50毫升培养瓶约80%汇合。本组中均传至第8代

细胞爬片的保存和抗原修复问题总结

，不要用4%多聚甲醛，以免抗原交联，这样组化时不用再抗原修复。细胞固定后可室温保存在丙酮中，不使之干燥。29. 如果是检测膜上的物质,好象不能用酒精。30. 适当密度后取出固定(丙酮-20固定10～20 min)，再进行免疫染色。31. 一批细胞爬片，如果细胞爬片是在玻璃上，冷丙酮固定15-20分钟，然后放-20度，没有问题。如果细胞爬片是在24孔板或6孔板里进行，冷丙酮会腐蚀板子，最好4%多聚甲醛。32. 细胞爬片用纯丙酮固定10分钟，取出干燥后用锡纸包裹，-70度保存。33. 4%多聚

大鼠脑微血管内皮细胞的分离与原代培养

的红细胞层之上的白黄色的层面即为纯化的微血管段，吸出后用DMEM漂洗两次（离心1000 r/min，5 min，室温），去上清液，加入DMEM完全培养液（含20%FBS，100 ug/ml肝素钠）悬浮后接种于涂布基质的35 mm一次性塑料培养皿（1.5 ml/培养皿，可接种1个培养皿/大脑），置于37 ℃、5%CO2培养箱内静置培养，12~24 h后换液，并加入1 ng/ml bFGF，随后隔天换液。 1.7 鉴定方法 形态学、Ⅷ因子相关抗原免疫组织化学检测 2.结果 2.1 细胞