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Olink蛋白检测服务是一种基于近端延伸技术(proximity extension assay, PEA)的高通量蛋白质分析平台,能够同时检测多种蛋白质的表达水平和相互作用。该技术通过使用一对与目标蛋白质特异性结合的抗体,每个抗体都连接有一个独特的DNA序列。当两个抗体与目标蛋白质结合时,它们的DNA序列会靠近,通过DNA聚合酶催化进行延伸和扩增,最终通过实时定量PCR(qPCR)检测DNA信号,实现蛋白质的定量分析。
实验流程
Olink蛋白检测服务的实验流程包括样本准备、蛋白质捕获、DNA延伸、qPCR检测等步骤。样本准备阶段需要准备血清、血浆或其他生物样本。蛋白质捕获阶段使用特异性抗体捕获目标蛋白质。在DNA延伸阶段,当两个抗体与目标蛋白质结合时,触发DNA序列的延伸和扩增。最后,通过实时定量PCR (qPCR) 检测扩增的DNA信号,实现蛋白质的定量分析。
分析内容
分析内容包括对qPCR检测得到的Ct值和NGS检测得到的count值,将根据对照样本进行质控,并通过归一化处理得到蛋白最终相对含量值。Olink的对照样本分为内部对照和外部对照。内部对照为了监测、控制和规范实验流程中的关键步骤,Olink设置了共4个内部对照,以相同浓度添加到每个样本中。外部对照则用于进一步确保实验的准确性和可靠性。
应用方向
Olink蛋白检测服务的应用方向广泛,包括疾病预测、诊断及预后,病例分层,基础研究,BioMarker深入筛选,新药靶点-pQTLs等研究中。此外,它还可用于生物标志物发现、疾病机理研究、药物开发和个性化医疗等领域。Olink技术在精准蛋白质组学研究中发挥重要功能,为多组学研究提供了新的选择,帮助科研人员更快、更自信地做出研究决策。
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文献和实验[1] Xu X, Ai L, Hu K, Liang L, Lv M, Wang Y, Cui Y, Li W, Li Q, Yu S, Feng Y, Liu Q, Yang Y, Zhang J, Xu F, Yu Y, Liu T. Tislelizumab plus cetuximab and irinotecan in refractory microsatellite stable and RAS wild-type metastatic colorectal cancer: a single-arm phase 2 study. Nat Commun. 2024 Aug 23;15(1):7255. doi: 10.1038/s41467-024-51536-x. PMID: 39179622; PMCID: PMC11343749.
[2] Zhong W, Edfors F, Gummesson A, Bergström G, Fagerberg L, Uhlén M. Next generation plasma proteome profiling to monitor health and disease. Nat Commun. 2021 May 3;12(1):2493. doi: 10.1038/s41467-021-22767-z. PMID: 33941778; PMCID: PMC8093230.
野生型p53蛋白可以通过诱导凋亡而抑制肿瘤的生长,突变型p53基因丧失了诱导细胞凋亡的能力,从而增强了细胞的恶性转化能力,而且在恶性肿瘤常可检测出突变型p53基因。p53蛋白也可能参与化疗药物诱导的细胞凋亡。本法运用一步夹心免疫法,定量检测野生型或突变型p53蛋白。 样本来源 1. 人、鼠、兔的组织切片 2. 肿瘤细胞株 材料与试剂 1. 过氧化物酶标记的多克隆抗人-p53全抗体(检测抗体); 2. 洗涤缓冲液(10x); 3. 过氧化物酶底物液: 四甲基联苯
1.P-糖蛋白是一种分子量170KD的跨膜糖蛋白(P170),它具有能量依赖性“药泵”功能。P-gP既能与药物结合,又能与ATP结合,ATP供能,使细胞内药物泵出细胞外,减低了细胞内的药物浓度使细胞产生耐药性。医学教育|网搜集整理MDR1有两种不同的表型:对第一次化疗产生的耐药天然性耐药;在化疗过程中产生耐药的获得性耐药。化疗前MDR高表达的肿瘤,其化疗作用往往不理想,化疗前MDR低表达的肿瘤,对化疗有较好的效果,化疗后高表达的肿瘤与肿瘤的疗效及复发有关,如非霍奇金病,急淋、慢淋
冷球蛋白是血清中的一种特殊蛋白质,在4℃时自发沉淀,加温至37℃时又可溶解,故常利用这种可逆性冷沉淀的特性对其进行测定。取患者外周血,分离出血清置4℃冰箱中,一般在24~72h出现沉淀,若1周仍不出现沉淀者方可判断为阴性。如形成沉淀,再置37℃温育使其复溶,也可将冷沉淀物离心洗涤后做定性与定量分析。 进行冷球蛋白研究和检测时,必须注意以下事项: ①部分单克隆冷球蛋白可在低于10℃时发生沉淀,故标本采集时必须将注射器和容器预温,离心及整个操作过程中也都要注意保温;
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