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思拓凡疏水色谱柱子 疏水填料 ge 疏水层析 ge







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文献和实验有差异。 可以做个摸索试验,以上柱子后目标蛋白和杂质的多少来判定合适比例。 复性浓度:文献中都建议稀释复性时浓度小于0.1mg/ml,其实这是总体上的经验。要具体问题具体分析,对于集落刺激因子,这个浓度可以上升到0.Xmg/ml,浓度提高对以后的纯化大有好处。 复性液尿素浓度:需含0.X到0XM的尿素,这可以通过调节裂解液蛋白浓度中加入。 复性时间:过夜即可。 5、蛋白纯化 5.1 疏水层析 复性结束后,体积可能达到几十升,好像很恐怖,其实根本不必害怕,上个疏水层析
体积受到限制,通常可对样品进行浓缩,浓度低于 70 mg/mL 通常是可以接受的,但要根据不同样品具体性质确定(考虑样品稳定性、样品黏度等)。 ⑵ 吸附性层析 所使用的填料载量和柱体积共同决定。 ⑶ 离子交换或疏水层析 真实上样量:对于一个给定的离子交换或疏水填料,真实上样量一般在 5~40% 的有效载量(因为带有同样性质电荷的杂质也会结合在柱子
。如果不是用AKTA、Bio-Rad之类的高级仪器,就必须要了。 (14)蠕动泵 简单纯化系统用、包涵体稀释复性。推荐品牌:兰格、GE公司P50。 (15)纯化系统 高级的纯化系统了。推荐品牌:AKTA explorer、AKTA Purifier。不推荐bio-rad的DUOFLOW。 (16)膜超滤器 蛋白样品浓缩、缓冲液置换、以及药品级蛋白纯化时缓冲液的去内毒素用。推荐品牌:Millipore Labscale、Pellicon(泵可用国产的兰格) (17)蛋白电泳仪 SDS
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