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- 供应商：
Seebio
- 规格：
1kit
保存条件： 2~8℃
产品内容：5ml Seebio rProtein G SeePUR预装柱+300ml Binding buffer +125ml Elution buffer
产品内容：5ml Seebio rProtein G SeePUR预装柱+300ml Binding buffer +125ml Elution buffer
抗体纯化是目前生产生物制剂和单抗药物的重要步骤：无论是用于单抗药物的纯化，还是抗体的生产，都具有广阔的应用前景，抗体产率的提升对利润的影响是巨大的。西宝生物倾情推出rProtein G SeePUR预装柱系列产品，极大的提高了抗体纯化效率！
我们的产品组成
西宝生物rProtein G SeePUR预装柱系列产品由以下三部分组成（小鼠抗体IgG纯化为例）：
- 与小鼠抗体相结合的蛋白G结合填料——rProtein G SeePUR预装柱；
- 用于小鼠抗体结合于填料上的结合缓冲液——Protein G IgG Binding Buffer；
- 将结合的小鼠抗体从填料上洗脱下来的洗脱缓冲液——IgG Elution buffer。
表1 Seebio Biotech生产rProtein G SeePUR预装柱系列产品参数
|
特性
|
rProtein G SeePUR
|
特性
|
rProtein G SeePUR
|
|
柱体积规格
|
1mL, 2mL, 5mL, 70mL, 150mL
|
填料稳定性
|
＞20纯化周期
|
|
基质组成
|
4%高交联度琼脂糖
|
pH稳定性
|
pH 2~11
|
|
基质平均粒径
|
90μm
|
推荐工作pH范围
|
pH 3~10
|
|
功能基团
|
rProtein G: 22.5 KDa;
IgG结合位点：B,C Domain |
推荐在位清洗pH范围
|
pH 2~11
|
|
配基密度
|
＞10mg rProtein G/mL基质
|
工作温度
|
4~40℃
|
|
结合能力
|
25-49mg人IgG/mL填料
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运输条件
|
20%乙醇浸泡，室温运输
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推荐流速
|
30~150 cm/min
|
贮藏条件
|
20%乙醇条件下，4~8℃保存
|
我们的产品优势
- 产量优，纯度高
1 mL填料从人血清中单次纯化可获得大于25 mg的IgG抗体，纯度达95 %以上。
- 特异性更高，亲和性更强
本产品使用的rProtein G是通过基因工程重组蛋白的方法表达获得，重组表达的rProtein G极大程度上地去除了除Fc端以外的其他非特异性结合位点。
- 操作简便、稳定、重复性佳
可直接用于从血清、腹水中纯化IgG抗体，或是用于纯化含Fc片段的重组蛋白。
- 纯化效率大幅提升
采用了高配套偶联技术，使得有限的结合位点，结合更多蛋白G
我们的应用案例
实用案例一：
Seebio rProtein G SeePUR预装柱在小鼠腹水IgG纯化中的应用
目前，某大型生产客户采用美国某知名品牌的三种产品配套（包括蛋白G填料、结合缓冲液液、洗脱缓冲液），纯化其腹水B产品，产量为1.642-2.18mg/mL，使用西宝生物rProtein G SeePUR系列产品对提供的腹水B进行纯化，产量达到2.815-3.673mg/mL。
抗体生产一般受腹水种类和批次影响较大，但评估纯化产品效果一般以最好的结果来衡量，上述西宝生物（2.815-3.673mg/mL）VS美国某知名品牌（1.642-2.18mg/mL）
证明：西宝生物纯化效率较美国同种产品有20-50%的提高!
实用案例二：
Seebio rProtein G SeePUR预装柱在人血清IgG纯化中的应用
美国某知名品牌的rProtein G Sepharose 4B亲和层析柱对人血清进行纯化（图1，Lane 4~8为IgG洗脱管），其对人IgG的最大结合量为约34 mg/mL Medium （其说明书称最大结合量＞25 mg/mL Medium）；
使用西宝生物rProtein G SeePUR预装柱对人血清进行纯化（图2，Lane 6~9为IgG洗脱管），其对人IgG的最大结合量约为66 mg/mL Medium，纯化效果远远优于该同类产品。
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| 图1 美国某知名品牌rProtein G Sepharose 4B 亲和层析柱纯化结果 |
图2 西宝生物rProtein G SeePUR预装柱 亲和层析纯化结果 |
实用案例三：
Seebio rProtein G SeePUR预装柱 20141201-（1）结合兔IgG能力评估结果
评估背景：rProtein G柱是抗体纯化，特别是鼠单克隆抗体纯化的重要材料，美国某知名品牌生产的2mL预装柱采用兔抗体进行检测，每毫升填料的兔抗体结合量为~18mg/mL。为准确评估本公司生产的rProtein G SeePUR预装柱，特进行下列实验：
目的：用兔IgG评估Seebio rProtein G SeePUR预装柱20141201-（1）结合兔IgG能力
|
时间：2014年12月02日
|
柱填料体积：1mL
|
柱填料：rProtein G Lot 20141201-（1）
|
|||
|
样品：兔IgG （100mg in PBS，11.3mg/mL）×9mL
|
样品体积：9mL
|
上样方式：上样1次
|
|||
|
平衡：PBS
|
Wash：PBS
|
Elution：IgG Elution Buffer（pH2.8）
|
|||
|
计算公式：兔IgG质量（mg）=体积（mL）×浓度（mg/mL）【浓度=稀释倍数×OD280/1.35】
|
|||||
|
管号
|
体积（mL）
|
稀释倍数
|
OD280
|
浓度（mg/mL）
|
质量（mg）
|
|
1
|
2
|
1
|
0.910
|
0.674
|
1.348
|
|
2
|
2
|
10
|
2.556
|
18.933
|
37.867
|
|
3
|
2
|
5
|
0.872
|
3.230
|
6.459
|
|
4
|
2
|
1
|
1.584
|
1.173
|
2.347
|
|
5
|
2
|
1
|
1.257
|
0.931
|
1.862
|
|
6
|
2
|
1
|
0.000
|
0.000
|
0.000
|
|
总质量（mg）
|
49.883
|
||||
评估结论：本公司生产的rProtein G填料，每毫升可结合49.88mg/mL 兔IgG，结合效率远远超出美国知名品牌所规定的技术指标（18mg/mL），此外，操作更快速，简便！
图3 Seebio rProtein G SeePUR预装柱
鉴于结合效率高，西宝生物rProtein G SeePUR预装柱系列产品已被众多国内鼠单抗纯化公司长期订购。抗体的价值很高，每毫克达到200-400USD，抗体产量提高，大大提高了抗体生产公司的利润。西宝生物rProtein G SeePUR预装柱系列产品无疑是您抗体纯化过程中低成本高产率的明智之选！
表2 Seebio rProtein G SeePUR预装柱系列产品列表
|
货号
|
商品名称
|
级别规格
|
包装规格
|
价格
|
|
Seebio rProtein G SeePUR预装柱
|
1ml/column
|
1根
|
询价
|
|
|
Seebio rProtein G SeePUR预装柱
|
2ml/column
|
1根
|
询价
|
|
|
Seebio rProtein G SeePUR预装柱
|
5ml/column
|
1根
|
询价
|
|
|
Seebio rProtein G SeePUR预装柱
|
70ml/column
|
1根
|
询价
|
|
|
Seebio rProtein G SeePUR预装柱
|
150ml/column
|
1根
|
询价
|
|
|
Seebio rProtein G SeePUR预装柱套装（配结合/洗脱缓冲液）
|
|
1kit
|
询价
|
|
|
Seebio rProtein G SeePUR预装柱套装（配结合/洗脱缓冲液）
|
|
1kit
|
询价
|
|
|
Seebio rProtein G SeePUR预装柱套装（配结合/洗脱缓冲液）
|
|
1kit
|
询价
|
|
|
Seebio rProtein G SeePUR预装柱套装（配结合/洗脱缓冲液）
|
|
1kit
|
询价
|
|
|
Seebio rProtein G SeePUR预装柱套装（配结合/洗脱缓冲液）
|
|
1kit
|
询价
|
|
|
IgG Elution Buffer
|
|
0.5L
|
询价
|
|
|
Protein G IgG Binding Buffer
|
|
0.5L
|
询价
|
附 表3 Immunoglobulin Reactivity with Protein A & Protein G
| Immuno-globulins |
Protein A
|
Protein G
|
Immuno-globulins
|
Protein A
|
Protein G
|
|
Human IgG1
|
++++
|
++++
|
Rat IgG1
|
-
|
+
|
|
Human IgG2
|
++++
|
++++
|
Rat IgG2a
|
-
|
++++
|
|
Human IgG3
|
-
|
++++
|
Rat IgG2b
|
-
|
++
|
|
Human IgG4
|
++++
|
++++
|
Rat IgG2c
|
+
|
++
|
|
Human IgA
|
++
|
-
|
Rat IgM
|
+/-
|
-
|
|
Human IgD
|
++
|
-
|
Rabbit Ig
|
++++
|
+++
|
|
Human IgE
|
++
|
-
|
Chicken Ig
|
-
|
+
|
|
Human IgM
|
++
|
-
|
Hamster Ig
|
+
|
++
|
|
Mouse IgG1
|
+
|
++++
|
Guinea pig Ig
|
++++
|
++
|
|
Mouse IgG2a
|
++++
|
++++
|
Bovine Ig
|
++
|
++++
|
|
Mouse IgG2b
|
+++
|
+++
|
Horse
|
++
|
++++
|
|
Mouse IgG3
|
++
|
+++
|
Cow
|
++
|
++++
|
|
Mouse IgM
|
+/-
|
-
|
Pig
|
+++
|
+++
|
|
|
|
|
Sheep
|
+/-
|
++
|
|
|
|
|
Goat
|
-
|
++
|
注意事项：
请在实验前仔细阅读Seebio rProtein G SeePUR预装柱使用说明。同时，将需要的所有试剂、耗材拿出置于室温，恢复至室温使用。
Seebio rProtein G SeePUR预装柱可重复使用15-20次：每次使用完后用Elution Buffer 10-5柱体积洗脱1-2次；然后把柱子浸泡入20%乙醇的容器中4度存放即可；重复使用时应避免不同品系的交叉污染。为保证好的使用纯化质量，建议重复使用次数不宜过多。
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文献和实验相关实验
抗 His 标签的抗体进行 WB 检测）且充分释放至上清中，确认蛋白是流穿还是未被洗脱 。 A：若目的 His 标签蛋白流穿 ● 样品或结合缓冲液的条件不合适，注意螯合剂或强还原剂以及咪唑的浓度。 ● His 标签蛋白与填料的结合较弱：降低上样流速或增加孵育时间；增加标签 His 的数量（常用 6～10 个）。 ● His 标签未充分暴露：在变性条件（4～8 M 尿素或 4～6 M 盐酸胍）下进行纯化或测试；重新构建克隆，改变 His 标签的位置。 ● 尝试其他的金属离子：如 Zn
【原创】实验方法分享：用某品牌rProtein A填料有效纯化小鼠腹水单抗
很多免疫教科书上描述，人和兔子，还有猪的抗体可以用proteinA亲和纯化。小鼠腹水单抗用protein G亲和介质进行纯化。 但是在实际科研中，我们发现用新的rProtein A也可以对小鼠腹水进行有效纯化 我和不少人说起过这个事，但是还是有很多怀疑和种种疑问 挑战经典理论确实是件难事 我摘抄了实验室一次实验与大家分享，希望对大家有所帮助 简单的实验步骤，适合没有层析仪，又希望快速得到抗体的实验室（此次纯化实验耗时约2小时）： 1，用binding buffer
原因：杂质和标签蛋白结合在一起 策略：在超声破碎细胞之前加入去垢剂或者还原剂;增加去垢剂的浓度( 2% Triton X-100 or 2% Tween 20);或者在Wash buffer 中增加甘油的浓度(50%) 减少非特异性的相互反应;考虑增加咪唑的浓度或者改变金属离子。 可能原因：洗涤不充分 策略：增加洗涤的次数，使洗涤充分。 蛋白过镍柱纯化步骤中，因为现在很多都是预装柱，也就不用自己装填料了，一般的蛋白纯化 也就只有上样和洗脱两个步骤
技术资料暂无技术资料 索取技术资料
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