固定组织DNA/RNA提取试剂盒，阿拉丁

产品简介:

本试剂盒适用于从石蜡包埋组织中有效纯化基因组DNA及总RNA。本品使用专门 优化脱蜡剂和裂解液，释放组织切片样本中的DNA、RNA，不涉及有机试剂二甲苯， 无需过夜操作；消化后的样品在较高的温度孵育后，去除由交联造成的抑制作用，有 效提高核酸的产量和纯度；优化的缓冲系统使裂解液中的核酸可特异结合到吸附膜 上，抑制剂通过两步漂洗步骤有效去除，最后使用低盐缓冲液或水洗脱，即可获得高 纯度DNA、RNA。同时配置高效微量吸附柱，洗脱体积可低至20μl。经过纯化的 DNA、RNA可以直接用于PCR、Real-time PCR、SNP基因分型、STR基因分型、二 代测序、药物基因组学研究和印迹分析等实验。

自备试剂：

无水乙醇

实验前准备及重要注意事项  

1.获得样品后，要尽快将样品固定，固定时间以14-24小时为宜，时间过长易导致 DNA、RNA断裂，影响下游实验。如果甲醛固定时间过长或样本存放时间过久 （＞1年）则易导致DNA完整性受损，无法扩出长片段。 

2.确保包埋前的样品彻底脱水，残留的福尔马林会抑制Proteinase K的作用。 

3.向Proteinase K中加入1.25 ml Proteinase K Storage Buffer使其溶解，-20℃保存。 配制好的Proteinase K勿长时间室温放置，以免影响其活性。 

4.第一次使用前应按试剂瓶标签说明先在Buffer RW2、Buffer GW1和Buffer GW2中 加入无水乙醇。 

5.使用前请检查Buffer GTL、Buffer GL和Buffer DS是否出现结晶或者沉淀，如有结 晶或者沉淀，请将Buffer GTL、Buffer GL和Buffer DS于37℃水浴重新溶解。 

6.实验开始前将水浴锅或恒温混匀仪预热至56℃。 

7.请使用常温离心机，或将离心机温度设置为25℃，若温度低于15℃可能会导致吸 附柱堵塞。 

8.预防RNase污染，应注意以下几方面： 

1）使用无RNase的塑料制品和枪头，避免交叉污染。 

2）玻璃器皿应在使用前于180℃高温下干烤4小时，塑料器皿可在0.5 M NaOH中 浸泡10分钟，用水彻底冲洗后高压灭菌。 

3）配制溶液应使用无RNase的水。 

4）操作人员戴一次性口罩和手套，实验过程中要勤换手套。

操作步骤 

石蜡包埋样本

1.将组织块多余的石蜡修剪掉，露出组织后切成5-10 µm的薄片。 

2.取约1×1 cm2 的切片（共约1-5片切片）置于离心管（自备）中，加入500 μl Buffer DS， 涡旋震荡10秒。短暂离心将样本收集到管底。56°C孵育3分钟，水浴锅中取出后静 置，降至室温后进行下一步操作。 注意：如果样品表面暴露在空气中，最初的2-3片弃掉不用。

3.12,000 rpm离心2分钟，小心彻底吸弃上清液，不要吸到沉淀。可用小枪头（10μl）小 心去除残留的脱蜡液。 

4.上述管中加入180 μl Buffer GTL和20 μl Proteinase K，涡旋震荡混匀。 

5.56℃孵育15分钟，然后冰上放置3分钟。室温，12,000 rpm离心15分钟。 

6.转移上清液至新的1.5 ml离心管用于RNA提取，注意不要吸到未消化组织。将沉淀 用于DNA提取。

RNA提取

7.把第6步得到的上清液，80℃孵育15分钟。 

8.加入320 μl Buffer GL，涡旋震荡混匀后加入720 μl无水乙醇，立即涡旋震荡混匀。 

9.所得的溶液全部加入到已装入收集管的吸附柱（Spin Columns RS）中，一次不能 加完溶液，可分多次转入。12,000 rpm离心1分钟，倒掉收集管中的废液，将吸附 柱重新放回收集管中。 注意：若吸附柱堵塞，可能是样本量过多，应考虑将起始切片数量减少为1-2片。 

 可选步骤： 

a. 向吸附柱中加入350 μl Buffer RW1，12,000 rpm离心1分钟，弃废液，将吸附柱重 新放回收集管中。 

b. 配制DNase I 混合液：取52 μl RNase-Free Water，向其中加入8 μl 10×Reaction Buffer和20 μl DNase I（1 U/μl），混匀， 配制成终体积为80 μl的反应液。 

c. 向吸附柱中直接加入80 µl DNase I 混合液，20-30℃孵育15分钟。 

d. 向吸附柱中加入350 μl Buffer RW1，12,000 rpm离心1分钟，弃废液，将吸附柱重 新放回收集管中。 向吸附柱中加入500 μl Buffer RW2，12,000 rpm离心1分钟，倒掉收集管中的废液， 将吸附柱重新放回收集管中。若需去除基因组DNA，可按照以下步骤进行 

11.重复步骤10。再12,000 rpm离心2分钟，倒掉收集管中废液。将吸附柱置于室温5 分钟以彻底晾干。

12. 将吸附柱置于一个新的无RNase离心管中，向吸附柱的中间部位悬空加入20-50 μl RNase-Free Water，室温放置5分钟，12,000 rpm离心1分钟，收集RNA溶液， -80℃保存。

DNA提取 

 7.取第6步获得的沉淀，加入180 μl Buffer GTL和20 μl Proteinase K至沉淀中。涡旋 15秒重悬沉淀。 

8.56℃孵育1小时，直至样品完全溶解。90℃孵育1小时。

9.加入200 μl Buffer GL，涡旋震荡混匀后加入200 μl无水乙醇，涡旋震荡彻底混匀。 短暂离心，使管壁上的溶液收集到管底。 

1.将步骤9所得溶液全部加入已装入收集管的吸附柱（Spin Columns DF）中，一次 不能加完溶液，可分多次转入。12,000 rpm离心1分钟，倒掉收集管中的废液，将 吸附柱重新放回收集管中。 注意：若吸附柱堵塞，可能是样本量过多，应考虑将起始切片数量减少为1-2片。

11.向吸附柱中加入500 μl Buffer GW1，12,000 rpm离心1分钟，倒掉收集管中的废 液，将吸附柱重新放回收集管中。 

12.向吸附柱中加入500 μl Buffer GW2，12,000 rpm离心1分钟，倒掉收集管中的废 液，将吸附柱重新放回收集管中。 注意：如需进一步提高纯度，可重复步骤12。 

13.12,000 rpm离心2分钟，倒掉收集管中废液。将吸附柱置于室温5分钟以彻底晾干。 注意：这一步目的是将吸附柱中残余乙醇去除，乙醇残留会影响后续酶促反应。

14.将吸附柱置于一个新的1.5 ml离心管中，向吸附柱的中间部位悬空加入20-50 μl Buffer EB，室温放置5分钟，12,000 rpm离心1分钟，收集DNA溶液，-20℃保存。