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- 2026年01月03日
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北京诺禾致源科技股份有限公司
- 服务名称：
10X单细胞CRISPR
单细胞CRISPR筛选产品能够高通量筛选CRISPR敲除/激活/抑制对单个细胞转录组层面产生的影响，利用10x Genomics平台的单细胞捕获技术，实现一个样本同时分析成千上万个细胞的表达谱，以及其中的近百种CRISPR扰动，进而探究单个基因敲除/激活/抑制后对单个细胞层面的影响，从而揭示更多基因的未知功能。
单细胞 CRISPR 筛选产品首先需要客户根据靶基因设计gRNA，然后将设计好的 gRNA 序列组装到慢病毒载体上用于后续细胞的转化，接下来将组装好的慢病毒对细胞进行转染，并对转染后的细胞通过流式或者抗生素的方法进行筛选。然后通过10x 平台对筛选后的细胞进行捕获：在油包水的反应体系中，Gel Beads 上的oligo 序列会捕获细胞中的 gRNA 序列，并且根据 gRNA 上的 protospacer 序列知道是哪一种 gRNA 转导进了细胞，进而在检测每个细胞表达谱数据的同时，检测每个细胞受到已知gRNA扰动后基因表达的变化情况。最终通过生信分析，以聚类分析、差异分析、功能分析的方式呈现结果。
应用方向
功能基因组学研究
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- ✓ 细胞间转录本异质性研究
- ✓ 基因作用机制研究
- ✓ 靶标基因发现
- ✓ 靶标基因验证
- ✓ 基因变异研究
- ✓ GWAS/eQTL研究中SNP的验证
诺禾优势
- 1.超过30000例单细胞样本制备经验，丰富完善的各物种样本类型制备方法，全流程一站式服务
- 2.高通量、低成本、高灵敏度的CRIPSPR筛选同时完成对细胞间的异质性研究
- 3.能在一次实验中获得扰动的转录组数据，清晰地了解细胞类型特异性的基因功能和通路信息，揭示干扰基因潜在的功能作用。
- 4.可广泛应用于生物学过程功能基因及调节基因筛选、疾病相关基因及其遗传变异筛选、肿瘤表型筛选、耐药基因筛选、治疗新靶点筛选、免疫机制筛查等领域的研究中。
常见问题
1. 如何确保样品在10x捕获时仍然保持sgRNA的表达？
客户可以通过多种手段，比如双抗、FACS、bulk RNA-seq、qPCR等，确定sgRNA在细胞中稳定表达以及表达水平。为了保证您的样本足够新鲜，建议提供新鲜制备的细胞悬液并选择上门捕获服务。
2. 10x CRISPR技术可以检测哪些CRISPR扰动？
10x单细胞CRISPR技术已证实可以检测的扰动有CRISPR敲除(CRISPRko)，CRISPR抑制(CRISPRi)，和CRISPR激活(CRISPRa)。
3. 10x CRISPR选择3’捕获还是5’捕获？二者有什么区别？
5’ CRISPR筛选能够于现有的大多数Cas9的sgRNA载体兼容。对于已有CRISPR文库或首次进行单细胞CRISPR筛选实验的客户，建议选择5’捕获。
3’ CRISPR筛选需要将特定的捕获序列添加到载体中来捕获sgRNA。如果您想将单细胞CRISPR与之前使用Feature Barcode进行的3’转录组数据进行比较，建议选择3’捕获，以减少批次效应。
4. 10x CRISPR如何计算目标捕获细胞数？
建议每个基因设置1-5种sgRNA，再添加10%的非靶向sgRNA，每个sgRNA建议捕获100-200个细胞。
例如：20个目标基因，每个基因2个sgRNA，5个非靶向sgRNA，总共45个sgRNA（20*2+5），建议捕获至少4500个细胞。
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文献和实验[1]. Daniloski, Zharko et al. “Identification of Required Host Factors for SARS-CoV-2 Infection in Human Cells.” Cell vol. 184,1 (2021): 92-105.e16. doi:10.1016/j.cell.2020.10.030
Nature：基于CRISPR/Cas系统通过直接注射单细胞的胚胎来介导大鼠基因编辑
CRISPR/Cas-mediated genome editing in the rat via direct injection of one-cell embryos基于CRISPR/Cas系统通过直接注射单细胞的胚胎来介导大鼠基因编辑 Conventional embryonic stem cell (ESC)–based gene targeting, zinc-finger nuclease (ZFN) and transcription activator–
开发、基因编辑、CRISPR 编辑、T 细胞单克隆、B 细胞单克隆、hiPS细胞单克隆等应用。 WOLF流式细胞分选仪 WOLF流式细胞分选仪优势 ▲微流控芯片轻柔分选细胞，确保细胞高活性 全程分选压力小于2psi, WOLF 比任何传统流式分选都要柔和，对细胞的伤害极低。此外对于组织酶解得到的还可以去除死细胞，轻松满足10x Genomics要求的细胞活性大于90%的标准，让您不再为细胞活性低而头疼！ ▲轻松实现单个细胞分选，简单高效 WOLF流式
高的增殖和免疫反应能力，这为全面了解 PD1-19bbz 回输前后状态的变化并解释其临床表现提供了数据支持。 Summary 研究团队利用 CRISPR/Cas9 基因编辑系统,在不使用病毒载体的情况下成功制备了靶向 CD19 的 PD1 下调定点整合型 CAR-T 细胞，并通过临床试验证明了其临床治疗的安全性和有效性。进一步结合单细胞测序技术，证实了非病毒 PD1 定点整合 CAR-T 细胞具有更高比例的记忆性 T 细胞和更强的免疫反应能力。本研究对推动 CAR-T 技术的发展具有重大
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