AAV Purification Kit Mini for

碧云天生产的AAV Purification Kit Mini For All Serotypes，即全血清型腺相关病毒小量纯化试剂盒(Adeno-associated Virus Purification Kit Mini for All Serotypes)，也称全血清型AAV病毒小量纯化试剂盒或全血清型AAV小量纯化试剂盒，是一种可实现快速从约30ml细胞和培养上清液中获得高活性、高纯度、高回收率腺相关病毒(Adeno-associated Virus, AAV)的试剂盒。本产品适用于各种血清型AAV的提取和纯化，操作简单易行，无须密度梯度离心，在6小时内即可实现AAV的高效纯化，并且经浓缩后AAV浓度可提高10-100倍。

腺相关病毒(Adeno-associated Virus, AAV)是Dependovirus属Parvovirus家族的微小单链DNA病毒，包含100多种血清型。其所介导的基因转移系统可整合至基因组中从而维持外源基因长期稳定表达，广泛用于基因治疗、动物体内目的基因的过表达或敲减等，是一种重要的基因操作工具。在进行外源基因稳定表达或目的基因敲减等研究时，需要使用高纯度、高滴度的AAV感染动物和细胞。常见的获得AAV的方法，包括密度梯度超速离心法和色谱纯化法等。密度梯度超速离心法通常存在回收效率低、成本高、处理时间长、操作复杂、样品损失大等缺点，而色谱纯化法则需要大量的血清型特异性优化，成本较高，极大限制了高活性、高纯度AAV的制备[1]。本试剂盒对于AAV的提取、纯化和浓缩步骤进行了多方面优化，避免了反复冻融和超声破碎等繁琐耗时的操作，也无需进行密度梯度超速离心，极大简化了AAV的提取与纯化步骤，在节约时间的同时也可极大保留AAV的生物学活性[2, 3]。

本产品纯化的AAV纯度高。使用碧云天生产的AAV Purification Kit Mini For All Serotypes (C2906)纯化的AAV9-CRE-GFP的SDS-PAGE电泳效果请参考图1。

图1.使用碧云天生产的AAV Purification Kit Mini For All Serotypes (C2906)纯化的AAV9-CRE-GFP的SDS-PAGE电泳效果图。使用Lipo8000™转染试剂(C0533)包装4个150mm细胞培养皿的AAV9-CRE-GFP，转染前更换为无血清培养基，转染后继续培养3天。收集其中2个培养皿的细胞沉淀，用1ml DMEM将细胞重悬，于液氮中冷冻，再于37ºC融化，反复操作4次，14,000×g离心10分钟后取上清，最终得到约1ml病毒液(Before)；另外2个培养皿的细胞使用本试剂盒进行AAV9-CRE-GFP的纯化(详细步骤参考使用说明)，最终得到约120μl病毒液(After)。随后各取12μl病毒液加入3μl SDS-PAGE蛋白上样缓冲液(5X) (P0015)，吹打混合均匀，100ºC加热煮沸10分钟，进行SDS-PAGE电泳和考马斯亮蓝染色(P0017F BeyoBlue™考马斯亮蓝超快染色液)，并拍照观察结果。如图所示，使用本试剂盒纯化的AAV病毒，能够清晰观察到以AAV衣壳蛋白(VP1、VP2、VP3)为主的电泳条带，并显示出极高的病毒纯度。实际效果会因样品种类、检测条件等不同而存在差异，本图仅供参考。

本试剂盒纯化的AAV具有高效的生物活性和感染效果。使用碧云天生产的AAV Purification Kit Mini For All Serotypes (C2906)纯化的AAV9-CRE-GFP感染Loxp-STOP-loxp-mCherry HeLa Cells (C7998)的效果请参考图2。

图2.使用碧云天生产的AAV Purification Kit Mini for All Serotypes (C2906)纯化的AAV9-CRE-GFP感染Loxp-STOP-loxP-mCherry HeLa细胞(C7998)的效果图。96孔板每孔接种10,000个Loxp-STOP-loxP-mCherry HeLa细胞，培养过夜后，使用本试剂盒纯化获得的AAV9-CRE-GFP按照50,000 vp/cell进行感染，感染72小时后在荧光显微镜下观察相同位置视野效果图。结果如图所示，AAV9-CRE-GFP感染细胞后因表达GFP而呈现绿色荧光；Cre重组酶的表达导致Loxp-STOP-loxP-mCherry HeLa细胞中原本被阻断的mCherry被激活表达，从而使细胞呈现红色荧光，说明使用本试剂盒纯化获得的AAV9-CRE-GFP具有良好的生物活性和感染效果。实际检测效果会因检测仪器、实验条件等不同而存在差异，本图仅供参考。

本试剂盒适用范围广。本试剂盒可用于各种血清型AAV的纯化与浓缩。

本试剂盒无需超速离心。本试剂盒无需使用超高速离心机进行长时间离心，使用普通冷冻离心机即可完成所有操作。

本试剂盒纯化回收效率高、操作简单快速。本试剂盒操作步骤简单易行，能在6小时内实现AAV的快速、高效纯化，有效去除细胞和培养基中蛋白、细胞碎片、基因组DNA等杂质，AAV回收率高。同时，使用本试剂盒获得的AAV的可直接用于后续的病毒感染及AAV基因表达效果的检测和评估。

本试剂盒病毒浓缩效率高。使用本试剂盒进行病毒浓缩后，可有效去除细胞碎片及基因组DNA的污染，同时病毒浓度可提高10-100倍，病毒损失量少，并可保持正常的生物活性。

本试剂盒组分齐全、使用便捷。本试剂盒包含提取AAV所需的除氯仿以外的全套试剂，用户可直接使用或只需简单混合即可使用。

如果需要制备更大量的AAV，推荐选购碧云天的AAV Purification Kit Midi for All Serotypes (C2908)。

本试剂盒的小包装和中包装分别可以用于5次或20次30ml AAV的纯化，相当于每次可以用于约1个175cm2细胞培养瓶或1个150mm细胞培养皿包装的AAV病毒的纯化。通常每次30ml AAV的纯化可以获得约1011-1012vp的AAV。

包装清单：

保存条件：

-20ºC保存，一年有效。除Nuclease外，4ºC保存，至少3个月有效。超滤管可以室温保存。

注意事项：

需自备氯仿。

本试剂盒每次适用于约1个175cm2细胞培养瓶或1个150mm细胞培养皿包装的AAV病毒。

浓缩前后的病毒都应避免反复冻融，以免影响其生物活性和感染效果。

本产品使用前请仔细阅读附录《腺相关病毒使用安全规范》。本产品使用过程中涉及AAV，其生物安全等级为Biosafety Level 1 (BSL-1)，没有确凿证据显示会导致健康成人产生疾病(Not known to consistently cause diseases in healthy adults)，可以按照常规的微生物实验操作要求进行操作(Standard microbiological practices)。

本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内。

为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。