B528412-0010 生工 Top10感受态细胞10X1

克隆高手拉小弟一把

分钟； 5，  低温离心机4，2500rpm离心10分钟，弃上清； 6，  用25ml 0.1M CaCl2溶液重悬，冰浴20分钟； 7，  低温离心机4，2500rpm离心10分钟，弃上清； 8，  用800ul 0.1M CaCl2溶液重悬沉淀，冰浴30分钟； 五，  转化反应： 1，  每管连接反应产物（10ul）加入感受态细胞100ul, 冰浴30分钟； 2，  热休克：42度，90秒； 3，  马上冰浴5分钟； 4，  各管分别加入0.8ml 不含氨卞的LB肉汤, 37

【原创】山寨Stratagene“QuikChange Site-Directed Mutagenesis Kits”实验方案

PCR reaction: DNA template plasmid 0.2 ul 5×PrimeSTAR buffer 10 ul 10 uM oligo 1 1 ul 10 uM oligo 2 1 ul 2.5 mM dNTP 4 ul ddH2O 33.3 ul PrimeSTARTM HS DNA polymerase (2.5 U/ul, TAKARA) 0.5 ul PCR conditions： 95° 60 seconds

两个蛋白的爱情：GST pull-down 这件小事

Wash Ⅱ buffer 洗 5～10 遍，具体次数看两者的结合强弱，需要自己摸索。（当然有 protocol 介绍是用 PBS 去洗，每次离心之前在 4 ℃ 转动孵育 5～10 min，这样清洗效果相对较弱，具体怎么洗看自己喽）。5. 清洗结束后就可以加 loading 去煮蛋白跑 WB 了。不过如果你需要跑出来更漂亮的 WB 条带，可以把 pull-down 后的样品用 GST 洗脱液（购自生工，觉得买一瓶后用一辈子也用不完）把蛋白洗脱下来：在 pull-down 样品中加入 100 ul