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文献和实验液,加入6ml DMEM完全培养基,37℃孵育过夜,再换液。 7、培养过程中观察细胞生长情况。约2周后可观察到细胞病变(CPE)出现(如用pAdTrack-CMV质粒,由于含GFP,可观察到绿色荧光)。四、重组病毒鉴定 1、转导10-14d后,收集细胞沉淀,加入2ml灭菌的PBS混悬,冻融细胞,离心后收集上清保存于-80℃。 2、取30-50% 步骤1中上清,感染50-70%饱和度的25cm2方瓶中293细胞。2-3d后出现明显细胞病变。 3、感染后3-5d,当1/3-1/2细胞漂浮时
-DNA液,加入6ml DMEM完全培养基,37℃孵育过夜,再换液。 7 培养过程中观察细胞生长情况。约2周后可观察到细胞病变(CPE)出现(如用pAdTrack-CMV质粒,由于含GFP,可观察到绿色荧光)。 四 重组病毒鉴定 1 转导10-14d后,收集细胞沉淀,加入2ml灭菌的PBS混悬,冻融细胞,离心后收集上清保存于-80℃。 2 取30-50% 步骤1中上清,感染50-70%饱和度的25cm2 方瓶中293细胞。2-3d后出现明显细胞
体为散在于细胞同围或附于细胞膜表面的亮绿色小点。 ③电镜检查;用扫描电镜方法简便快速。也可以利用透射电镜。 ④DNA分子条文检查或支原体培养等方法:检出率高。但方法较为复杂 支原体是一类缺乏细胞壁的原核细胞型微生物,大小一般在0.3-0.5um之间,呈高度多形性,有球形、杆形、丝状、分枝状等多种形态。它不同于细胞,也不同于病毒。支原体用普通染色法不易着色,用姬姆萨染色很浅,革兰染色为阴性。支原体可在鸡胚绒毛尿囊膜上或细胞培养中生长,营养要求比细菌高。 细胞培养(特别是传代细胞)被支原
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