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文献和实验或0.5ml 灭菌的PCR 薄壁管中; 3. 如果不用PCR 仪的加热盖,在反应混合液的上层加30 ~ 50µl 的矿物油防止样品在 PCR的过程中蒸发; 二、按以下条件进行反应 Step Temperature,° C Time,min Number of cycles Note 逆转录 50
【旧贴整理】花了2星期系统归纳关于PCR的各位老师旧帖,与大家分享 --PCR
,也就是加样时沿着管壁螺旋式上升,等全部加完后离心混匀,如果有气泡,用手指轻轻弹几下,气泡就没了(有时ep管内有气泡,反正p时要加温,发现最后结果相差不大),而且确保液体都在管底。3)在用单个0.2ml PCR薄壁管做反应时,加在管壁,而不是管底,在管壁形成一个小液滴,每个小液滴都孤立存在,用手弹管壁最后离心。在加大量的药品时,如果1ml枪头一下吸满了液体,在枪头提出容器时,枪头尖端可能会存留一滴液体,很容易造成污染和浪费.我的技巧是在枪头提出容器时,将枪头放平,这样枪头尖端会有一个气泡,从而阻止了液体滴
①反应总体积根据实际情况进行调控,可以做 20~50µ l以节约试剂; ②将上表各成分加入到 0.2ml或 0.5ml灭菌的 PCR薄壁管中; 如果不用 PCR仪的加热盖,在反应混合液的上层加 30 ~ 50µ l的矿物油 防止样品在 PCR的过程中蒸发; 三、按以下程序进行PCR 扩增 PCR 反应条件视模板、引物等的结构条件不同而各异,在实际操作中需根据具体的情况以及 PCR结果而进行优化。 Step
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