泛素化修饰蛋白质组

实验原理 ：

泛素化修饰（Ubiquitylation）是一种常见的蛋白质翻译后修饰，是指一个或多个泛素分子（Ubiquitin，由76个氨基酸组成的多肽）在一系列特殊的酶作用下，将细胞内的蛋白质分类，从中选出靶蛋白分子，并对靶蛋白进行特异性修饰的过程。

泛素化修饰是一种重要的翻译后修饰，参与泛素化的酶包括泛素激活酶 (E1)、泛素偶联酶(E2)和泛素连接酶(E3)。泛素激活酶E1激活泛素并将泛素转移到E2，而E3则招募底物蛋白进行泛素部分的转移。单个泛素分子的C-末端赖氨酸与靶蛋白的一个赖氨酸侧链相连为单泛素化，与多个赖氨酸残基相连为多泛素化。

泛素-蛋白酶体系统介导了真核生物80%~85%的蛋白质降解。除参与蛋白质降解之外，泛素化修饰还参与了细胞周期、增殖、细胞凋亡、分化、转录调控、 基因表达、转录调节、信号传递、损伤修复、炎症免疫等几乎一切生命活动的调 控。

泛素化与肿瘤、心血管等疾病的发病密切相关。因此，作为近年来生物化学 研究的一个重大成果，它已然成为研究、开发新药物的新靶点。 胰蛋白酶消化会将泛素化修饰的蛋白质中除泛素的两个C末端甘氨酸残基之外的所有残基切掉，这两个C末端甘氨酸 (GG) 残基与修饰蛋白的赖氨酸残基的ε-氨基连接，形成Lys-ε-Gly-Gly (K-ε-GG)残留基团。K-ε-GG的存在可防止该位点继续被胰蛋白酶切割，同时K-ε-GG残基的存在使肽段分子量产生114.1Da的质量偏移。使用K-ε-GG特异性抗体识别和富集肽段，利用质谱可精确测定分子量是否发生114.1Da的质量偏移，从而检测泛素化修饰肽段及位点。 

技术特点：

• 灵敏度高，能够检测到低丰度的蛋白质，对其修饰类型进行定性和定量分析
• 准度性高，使用高分辨率高灵敏度质谱仪等设备，能够准确地鉴定泛素化修饰类型和修饰位点

应用：

• 大样本量泛素化修饰检测
• 临床诊断、疾病机理机制研究、个性化治疗研究
• 生物/非生物胁迫，生长发育等
• 致病机理，耐药机制，病原体-宿主相互作用研究等