DIA磷酸化蛋白质组

实验原理 磷酸化是一种普遍的存在的调节蛋白质功能的翻译后修饰(PTM)，占所有蛋白修饰的三分之一左右，影响细胞内信号转导、细胞增殖、凋亡、转录、代谢过程等等。在真核细胞中，磷酸化修饰只发生在丝氨酸（S）、苏氨酸（T）和酪氨酸（Y）这三种氨基酸的侧链上，细胞内pS:pT:pY的相对丰度比为1800:200:1。这些氨基酸有一个亲核(OH)基团，在激酶的催化作用下，将ATP的磷酸根基团， 转移到蛋白的氨基酸侧链上，ATP随之变为ADP。蛋白质磷酸化是一种可逆的PTM，由激酶和磷酸酶介导，分别使底物磷酸化和去磷酸化。具有磷酸化修饰的多肽相较于无磷酸化修饰的多肽多出79.9663Da的分子量，利用质谱技术测定是否发生79.9663Da的质量偏移，推测序列级磷酸化修饰位点。。  实验流程 首先，确定检测方案并收集样本；样本收集完成后进行前期处理，包括样本提取及蛋白质检；将蛋白质进行酶切后，富集磷酸化修饰肽段；液质联用质谱仪进行DIA质谱检测；利用软件进行蛋白组的定性、定量分析。  应用方向 大样本量磷酸化修饰检测 临床诊断、疾病机理机制研究、个性化治疗研究 生物/非生物胁迫，生长发育等 致病机理，耐药机制，病原体-宿主相互作用研究等