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文献和实验一、反应曲线 首先,我们了解一下化学反应的时间与吸光度一个曲线图,可以划分为四个区:延迟区、等速区、过渡区和平衡区,如下图所示: 二、反应原理 对于延迟区来讲,无规律可寻,对于指标检测没有意义。 等速区对应的指标检测方法是速率法。速率法又称连续监测法,是在测定酶活性或用酶法测定代谢产物时,连续选取时间-吸光度曲线中线性期内4个以上测光点作为读数点,并以单位时间吸光度变化值计算结果。线性期就是此期间内各测光点之间的吸光度差值相等,此线性期对酶促反应的底物来说属于零级反应。其测光点一般设置在加入
酶组织化学酶显示方法 1.偶联偶氮色素法 此法又称偶氮色素法(couplingazo dyemethod),是指用某种人工合成底物在酶作用下产生分解产物,分解产物与重氮盐结合,引起偶联偶氮反应,形成不溶性偶氮色素,以此对酶定位。常用的底物是萘酚系列化合物,如l―萘酚、2―萘酚、6―溴―2―萘酚、萘酚AS、萘酚AS衍生物等。由于重氮盐的种类不同,偶氮色素的颜色也不同,可显示出紫色、蓝色、红色、褐色、棕色和黑色等各种颜色。 重氮盐有不同程度的抑制酶活性作用,因此必须选择抑制作用最弱
三磷酸胶瞽酶钙―钴法 三磷酸腺苷酶 可水解磷酸与磷酸之间的高能键,而释放大量能量,而磷酸酶是酯酶 ,能水解磷酸与碳酸之间的键。反应式如下: A--P~P~P+H2 O ATPase A―P―P+ H3 PO4 +能量 在生物膜上,ATP酶的功能是参与离子泵的主动运输,因此细胞膜呈强阳性,ATP酶可作为肝细胞早期受损的敏感指标。此酶活性在心肌最高,其次为骨骼肌、肺、肾脏、脑和胰腺。由于各种ATP酶的最适pH值不同,故所用显示方法也不同。下面仅
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