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文献和实验一、反应曲线 首先,我们了解一下化学反应的时间与吸光度一个曲线图,可以划分为四个区:延迟区、等速区、过渡区和平衡区,如下图所示: 二、反应原理 对于延迟区来讲,无规律可寻,对于指标检测没有意义。 等速区对应的指标检测方法是速率法。速率法又称连续监测法,是在测定酶活性或用酶法测定代谢产物时,连续选取时间-吸光度曲线中线性期内4个以上测光点作为读数点,并以单位时间吸光度变化值计算结果。线性期就是此期间内各测光点之间的吸光度差值相等,此线性期对酶促反应的底物来说属于零级反应。其测光点一般设置在加入
260nm/O.D280nm能达到1.8左右为标准。分离与提纯过程中保持DNA的完整性和纯度存在许多困难,主要原因有:(1)细胞内存在很高的DNA酶活性,在分离与提纯过程中会造成核酸的降解。(2)DNA分子很大,分离过程中因化学因素或物理因素使DNA降解,如强酸、强碱、温度过高或机械张力剪切等。DNA的定量可采用化学的定磷法、定核酸法。目前多数实验室采用紫外分光光度法测定核酸含量,以下公式可作为紫外定量时参考:双链DNA含量:O.D260nm×样品稀释倍数×50μg/ml=μg/m1样品。器材
脂蛋白 lipoprotein , lipoproteid 为脂质和蛋白质的复合体。大致可分为生物膜等上面的不溶性的脂蛋白及血浆和卵黄中的水溶性脂蛋白。狭义的脂蛋白多指后者。历史上库恩( E . J . Cohn )等用乙醇沉淀区段法将血清脂蛋白分离,而称为α 1 、β - 脂蛋白。以后建立了用超离心机的上浮法( floatation method )作为分离方法。现在分离成由比重低的开始依次为乳糜微粒、超低密度脂蛋白( very low density lipoprotein
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