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48T, <i>96T</i>, 96T×5, 96T×10, 96T×100
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文献和实验一、反应曲线 首先,我们了解一下化学反应的时间与吸光度一个曲线图,可以划分为四个区:延迟区、等速区、过渡区和平衡区,如下图所示: 二、反应原理 对于延迟区来讲,无规律可寻,对于指标检测没有意义。 等速区对应的指标检测方法是速率法。速率法又称连续监测法,是在测定酶活性或用酶法测定代谢产物时,连续选取时间-吸光度曲线中线性期内4个以上测光点作为读数点,并以单位时间吸光度变化值计算结果。线性期就是此期间内各测光点之间的吸光度差值相等,此线性期对酶促反应的底物来说属于零级反应。其测光点一般设置在加入
RNA 的 trizol,好像贵一些。 2. 关于配套试剂: Trizol 法提取 RNA 是要用到氯仿、异丙醇和乙醇的。氯仿现在是违禁品,不大好买(我们学校试剂科现在不卖),所以买的时候要让试剂上给送,一般他们都能免费给送。氯仿遇光易分解,试剂商给你的时候应该是遮光的。异丙醇虽然没有特殊说明,但我查的据说也是最好避光保存,不过这种试剂都是棕色瓶子,能遮蔽大部分的光线了。 3. 关于实验时的防护: RNA 很容易降解,所以实验时一般都要求口罩帽子的,避免组织的污染。不过以我的经验
取出所需分装管,并在规定时间内使用完毕,避免整管长时间暴露于室温。 4. 机械解离法 vs 酶解法 vs 组合法? 解离方法各有优缺点,根据不同组织类型和需求选择合适的解离方式。 (1)机械解离法:通过剪切、研磨、吹打等物理力破坏细胞间连接,无需酶试剂无需孵育时间成本较低,但是容易造成细胞损伤(如碎片多活率低)和解离不完全(如致密组织),常用于快速解离脾脏等柔软组织。 (2)酶解法:利用蛋白酶(胶原酶、胰酶、木瓜蛋白酶等)降解细胞外基质,温和解离保护细胞膜完整性,但是易破坏表位,且需要挑选合适
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