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48T, <i>96T</i>, 96T×5, 96T×10, 96T×100
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文献和实验一、反应曲线 首先,我们了解一下化学反应的时间与吸光度一个曲线图,可以划分为四个区:延迟区、等速区、过渡区和平衡区,如下图所示: 二、反应原理 对于延迟区来讲,无规律可寻,对于指标检测没有意义。 等速区对应的指标检测方法是速率法。速率法又称连续监测法,是在测定酶活性或用酶法测定代谢产物时,连续选取时间-吸光度曲线中线性期内4个以上测光点作为读数点,并以单位时间吸光度变化值计算结果。线性期就是此期间内各测光点之间的吸光度差值相等,此线性期对酶促反应的底物来说属于零级反应。其测光点一般设置在加入
反应,确保试剂盒的特异性。 (3)快速。EMSA需要凝胶电泳,操作费时又不方便。使用转录因子活性ELISA检测试剂盒,能够在5h内得到结果。 (4)方便、安全。不涉及放射性,不用电泳。 (5)可同时检测1~96个样品。 (6)能够检测组织及细胞样品。 2.转录因子ELISA实验步骤(图2―10) 转录因子活性ELISA流程图 (1)核蛋白抽提物中转录因子与生物素标记探针结合形成转录因子/
转录因子表达情况,操作过程跟ELISA实验差不多,结果数值化呈现,判读更直观、分析更简单。用这个做就更有针对性一点,只做常见的转录因子,后续的实验安排也更有针对性。 加“分”Step 3 ● 高通量筛查后,通常要对表达差异的转录因子进行验证。 ● 验证方法很多,包括转录因子滤板法、EMSA、ELISA以及荧光素酶报告载体等。 ● 特别推荐一种适用于大量样本检测的“转录因子滤板法检测试剂”,一次实验可以检测96个样本中的转录因子
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