肺炎支原体核酸检测及分型试剂盒（探针法）

HLA基因分型方法：PCR－SSO（ASO）探针法

  PCR － SSO （ ASO ）探针法   1 ）常规提取 DNA   参见 RFLP 法     2 ） PCR 扩增   参见 PCR-RFLP 法     3 ）斑点杂交   1． 将 5 ～ 20 μ l 扩增产物，加变性液 100 ～ 200 μ l 室温处理 5 ～

「谁」动了我的扩增曲线？

子重新退火的速度比其与探针结合速度更快的情况下。Barratt 等人采用一步法对 HSV 病毒进行分型，结果发现扩增曲线产生了「鱼钩效应」，为了使反应能更多地产生与探针结合的那条单链，他们采用了不对称 PCR（反向引物浓度高于正向引物浓度）的方式，大大改善了「鱼钩效应」 [2]。 图 4. 杂交探针法发生「鱼钩效应」及解决方案 [2] 「鱼钩效应」对灵敏度、熔解曲线、数据分析有一定的影响，但这种现象一般发生在指数增长期之后，对数据分析着眼点放在指数增长期的绝对定量和相对定量结果影响不大

要想荧光定量 PCR 结果好，这些实验设置要点需记牢

这两个条件我们才可以选择快速反应模式。而 Standard Mode 和 Fast Mode 的主要区别在于不同模式下仪器升降温速率不同，快速模式下升降温速度更快。下图列举了当前部分用于基因表达和基因分型的 Master Mix 所支持的反应模式，供大家参考（图 4）。另外针对当前使用较为广泛的体外诊断试剂盒，如新冠检测试剂盒，大家在运行模式选择时需要根据试剂盒说明书做相应的设置，保证实验设置与试剂盒说明书一致。 图 4 常见基因表达和基因分型 master mix 支持反应模式整理