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文献和实验. 2) Inoculate 2 x 3-5ml cultures in 2xYAPD or SC media (15ml snap cap tubes) from the fresh streak and incubate O/N 30 deg, 200rpm. SC media may need to be seeded more heavily (or more tubes may be required). YAPD can be substituted for 2xYAPD but efficiency
2 x2H2 O 1M 147.02g/M 13.54 7.351g 29.40g 44.11g H2 O mQ 86.46 46.92ml 187.7ml 281.5ml Conc. Stock %(w/w) 50ml 200ml 300ml CaCl2 x 6H2 O 1M 219.08g/M 20.18 10.95g 43.82
30s,接着40个循环的94℃ 15 s,65℃ 20 s,68℃ 5 min],其中使用了1单位的ELONGASE酶混合物[PCR 50ml终体积,其中60 mM Tris-SO4(pH9.1),18 mM (NH4)2SO4,2 mM MgSO4,dNTP每个200 µM,引物每个400 nM ],其中分别是AAP和引物TSC-2-2826(A带)或引物TSC-2-1732(B带)一起使用。每个PCR产物(带1和带3)取10µl 在0.8%琼脂糖上,1倍TAE凝胶电泳和SYBRò绿染色(分子
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