血管舒张剂激活磷蛋白(VASP)等多因子检测试剂盒(流式荧光

Caspase活性检测系列（分光光度法）检测原理及操作指南

一、检测原理 Caspase (Cysteine-requiring Aspartate Protease)是在细胞凋亡过程中起重要作用的蛋白酶家族。Caspase在正常状态下以酶原的形式存在于胞浆中，没有活性；在细胞发生凋亡阶段，Caspase被激活，活化的Caspase可裂解相应的胞浆胞核底物，最终导致细胞凋亡。 Caspase分光光度法检测试剂盒的原理是将Caspase序列特异性的多肽偶联至黄色发光基团pNA (p-nitroaniline)。当该底物被活化的Caspase剪切后，黄色

蛋白质翻译后修饰（PTMs)概述

，以介导适当的蛋白质折叠或稳定，或将新生蛋白质引导到不同的细胞区室（例如，细胞核、膜）。折叠和定位完成后发生其他修饰，以激活或灭活催化活性或以其他方式影响蛋白质的生物活性。蛋白质也与靶向降解蛋白质的标签共价连接。除了单一的修饰外，蛋白质通常还通过翻译后切割和通过蛋白质成熟或激活的分步机制增加功能基团的组合进行修饰。根据修饰的性质，蛋白质 PTM 也可以是可逆的。例如，激酶在特定的氨基酸侧链上磷酸化蛋白质，这是催化激活或失活的常用方法。反之，磷酸酶水解磷酸基团将其从蛋白中去除，逆转生物活性。肽键的蛋白

【求助】如何提取细胞中的cAMP？和普通蛋白的裂解buffer一样么？

磷酸二酯酶抑制剂。 贴壁细胞可以用一般的蛋白裂解Buffer，有时要加磷酸二酯酶抑制剂。 关于是否需要乙酰化的问题，不同的试剂盒有不同的要求，主要取决于抗体是否灵敏，也取决于最后检测的方法。一般乙酰化之后可以提高10倍的检测灵敏度。如果抗体灵敏，可以免去乙酰化的那一步，太容易引入误差。 另外，如果用荧光法、发光法检测碱性磷酸酶或者辣根过氧化物酶的话，也没必要进行乙酰化，因为荧光法、发光法检测比显色法检测灵敏度高。 另外，Promega公司有基于培养细胞的cAMP检测试剂盒