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96T
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文献和实验环境的限制。实际操作中并非如此简单。显然,溶解的CO2与碳酸氢盐对良好的细胞生长是重要的。Leiboviz`s L15培养基可用来在大气环境中令神经细胞生长,该培养基采用了与众不同的BSS作基础,它含有高浓度的氨基酸来提高缓冲能力,培养基中使用半乳糖作碳源,以阻止培养基中乳酸形成,少量溶解的CO2由丙酮酸代谢产生。这一培养基的优点是明显的,特别是在保持较高CO2有困难时,例如在长时间的显微操作及生理学研究中。L15培养基已用来成功的培养了外周神经元,但尚未在CNS神经元的发育研究中全面检测过。血清
这两种物质缺乏时)。MEM与F12均要用5% 的CO2来平衡,DMEM含更高浓度的NaCO3,要用10%的CO2来平衡,当然也可以在较低CO2浓度下使用。这些基础培养基的组成成分是建立在对不同细胞系生长的研究之上的,但通常在原代培养中使用也能有比较令人满意的结果。 原则上,HEPES作为缓冲剂可用来代替碳酸氢盐,以解除需要高浓度CO2培养环境的限制。实际操作中并非如此简单。显然,溶解的CO2与碳酸氢盐对良好的细胞生长是重要的。Leiboviz`s L15培养基可用来在大气环境中令神经细胞
【求助】如何提取细胞中的cAMP?和普通蛋白的裂解buffer一样么?
磷酸二酯酶抑制剂。 贴壁细胞可以用一般的蛋白裂解Buffer,有时要加磷酸二酯酶抑制剂。 关于是否需要乙酰化的问题,不同的试剂盒有不同的要求,主要取决于抗体是否灵敏,也取决于最后检测的方法。一般乙酰化之后可以提高10倍的检测灵敏度。如果抗体灵敏,可以免去乙酰化的那一步,太容易引入误差。 另外,如果用荧光法、发光法检测碱性磷酸酶或者辣根过氧化物酶的话,也没必要进行乙酰化,因为荧光法、发光法检测比显色法检测灵敏度高。 另外,Promega公司有基于培养细胞的cAMP检测试剂盒
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