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文献和实验一台 WB 成像系统可以同时拍摄化学发光和荧光信号,这个功能有什么用途呢?一篇 2014 年发表在 Cell Stem Cell 的文章为了研究硫巯基化如何影响信号通路,就需要在进行 Western Blot 时同时捕捉2种信号。 蛋白质硫巯基化(S-sulfhydration, SHY)是一种依赖H2S的蛋白质翻译后修饰。H2S 作用于蛋白质的半胱氨酸残基,把巯基(-SH)转变为硫巯基(-SSH),改变蛋白空间结构,调控了蛋白的活性和功能。 这篇文章主要研究硫化氢(H2S)调节 Ca
(NO) 由一氧化氮合酶 (NOS) 的三种亚型产生,它是一种化学信使,与游离半胱氨酸残基反应形成 S-硝基硫醇 (SNOs)。Snitrosylation 是细胞用来稳定蛋白质、调节基因表达和提供 NO 供体的关键 PTM,SNOs 的生成、定位、激活和分解代谢受到严格调控。S-亚硝基化是一种可逆反应,SNOs 在细胞质中的半衰期较短,因为宿主的还原性酶,包括谷胱甘肽 (GSH) 和硫氧还蛋白 (thioredoxin),即脱硝酰基蛋白。因此,SNO 通常储存在膜、囊泡、组织间隙和亲脂性蛋白褶皱中,以保护其不脱
【求助】如何提取细胞中的cAMP?和普通蛋白的裂解buffer一样么?
磷酸二酯酶抑制剂。 贴壁细胞可以用一般的蛋白裂解Buffer,有时要加磷酸二酯酶抑制剂。 关于是否需要乙酰化的问题,不同的试剂盒有不同的要求,主要取决于抗体是否灵敏,也取决于最后检测的方法。一般乙酰化之后可以提高10倍的检测灵敏度。如果抗体灵敏,可以免去乙酰化的那一步,太容易引入误差。 另外,如果用荧光法、发光法检测碱性磷酸酶或者辣根过氧化物酶的话,也没必要进行乙酰化,因为荧光法、发光法检测比显色法检测灵敏度高。 另外,Promega公司有基于培养细胞的cAMP检测试剂盒
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