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文献和实验,PD-1/PD-L1这么值钱,大家一定好奇它到底是什么鬼。 PD-1全名是程序性死亡分子1(programmed death-1)是Ishida等[1]通过消减杂交技术于1992年发现的[2],是CD28家族成员,胞质区含有2个酪氨酸残基,1个位于靠近N端的免疫受体酪氨酸抑制基序(ITIM)中,另一个1个位于靠近C端的免疫受体酪氨酸转化基序(ITSM)中[2]。 PD-L1(CD274)是B7家族成员,是PD-1的配体,属于1型跨膜蛋白,全长290个氨基酸,包含1个IgV样
(交流)SELEX技术(Systematic Evolution of Ligands by Exponential Enrichment)
有三条:一是经典途径,即通过免疫动物产生多克隆抗体;二是细胞工程途径即用杂交瘤技术生产单克隆抗体;三是利用基因工程途径表达和改造抗体。 但是,蛋白类抗体的生产与应用存在如下限制: 毒性抗原免疫动物承受不了,免疫原性弱的难以产生抗体; 杂交瘤产生于鼠,治疗应用受限(HAMA);异源抗体在诊断中产生非特异性反应(假阳性),还受到类风湿因子和自身抗体的干扰; 成本高、费时费事,罕见抗体需大量筛选才能得到; 克隆株(细胞)的有效保存不易,有些杂交瘤难以在体内生长; 批间
5min,0.3%TritonX 5min,0.01mol/LPBS洗5mln,用滤纸吸干。 (9)90%甘油(PBS配制)封片。 (10)激光扫描共焦显微镜下观察,或于4℃避光保存。 2.免疫荧光双标记方法 免疫荧光的双标记是指同时标记细胞内两种蛋白质分子,当怀疑某种配体与已知受体结合后可用此方法加以证明。此方法稍微复杂一些,首先应注意所用的一抗必须是来自不同种属动物的两种特异性抗体(例如:A抗体为多克隆抗体,来自家兔;B抗体为单克隆抗体,来自小
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