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20ul
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文献和实验制备多克隆抗体抗原的准备和免疫原的注射剂量 抗原的种类繁多,包括天然的蛋白质抗原和细胞性抗原、合成肽抗原以及基因工程抗原等,不同的抗原免疫动物动物具有不同的特殊性。一般的完全抗原免疫动物需加用佐剂,合成肽抗原和基因工程抗原等半抗原物质需先通过人工的方法与蛋白质载体连接后再与佐剂混合免疫动物,方可获得理想的免疫效果。 免疫原的注射剂量应考虑其抗原性的强弱、分子量大小、动物的个体状态和免疫时间。对于细胞免疫的剂量,每次用于免疫羊的细胞
组织边缘 2 mm。 Q10:灶片状着色,如何调整? (1)洗涤液的残留:洗涤液的残留可能导致其对后续试剂产生稀释作用,需尽量甩干样本残余洗涤液。 (2)坏死组织灶,组织坏死后细胞破坏、酶的释放、蛋白游离、分解,复杂的肽链残段可能与一抗或/和二抗结合影响最终着色,因此在选择染色切片时应避免选择坏死组织较多的切片。 附实验小 Tips
降解测序。 五、注意事项 细胞裂解采用温和的裂解条件,不能破坏细胞内存在的所有蛋白质-蛋白质相互作用,多采用非离子变性剂(NP40 或 Triton X-100)。每种细胞的裂解条件是不一样的,通过经验确定。不能用高浓度的变性剂(0.2% SDS),细胞裂解液中要加各种酶抑制剂,如商品化的 cocktailer。 使用明确的抗体,可以将几种抗体共同使用。 使用对照抗体: ① 单克隆抗体:正常小鼠的 IgG 或另一类单抗 ② 兔多克隆抗体:正常兔
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