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文献和实验um滤膜过滤。将血清用PBS稀释一倍,然后加入连好抗原的beads,密封好,4 ℃摇晃过液或者室温摇晃3至四小时,摇晃时最好能颠倒来回摇动,确保所有beads都能悬在液体中。室温孵育时间不宜过长,否则会引起非特异性吸附,同时影响抗体质量。 6. 非特异性结合的抗体的洗涤 第5步完成后,过柱或者离心去掉血清成份,用PBS洗涤三次。然后再用一个稍稍Harsh一点的体系去洗掉与抗原非特异性结合的蛋白,怎么样的体系算是比较Harsh呢? 一种是偏酸或偏碱一点的pH,可以加酸或加碱
Polymer二抗进行了反应的放大,该方法敏感性较高,可缩短抗体孵育时间或降低抗体浓度。 (2)内源性过氧化物酶残余:适度延长内源性过氧化物酶阻断剂阻断时间。 (3)一抗导致的非特异性染色:多克隆抗体易于产生非特异性染色,结合抗体官网信息合理选择多克隆抗体或单克隆抗体。 (4)一抗种属来源与组织样本来源相同:如使用鼠源一抗检测小鼠组织,尽量选择种属来源与样本种属不同的一抗。 (5)切片或细胞过于干燥:实验过程中,需保持样本的湿润。 Q5:阳性染色细胞定位不正确,如何修正? (1)抗原修复条件不合理:尝试改变
免疫组化基础知识 免疫组织化学的概念: 免疫组化就是利用抗原与抗体特异性结合的原理,通过化学反应使标记抗体的显色剂 (荧光素、酶、金属离子、同位素) 显色来确定组织细胞内抗原(多肽和蛋白质),对其进行定位、定性及定量的研究,称为免疫组织化学。 免疫组化实验所用的抗体有哪些? 免疫组化实验中常用的抗体为单克隆抗体和多克隆抗体。单克隆抗体是一个B淋巴细胞克隆分泌的抗体,应用细胞融合杂交瘤技术免疫动物制备。多克隆抗体是将纯化后的抗原直接免疫动物后,从动物血中所获得的免疫
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