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文献和实验摘要目的]以环氧合酶2为例,具体介绍本实验室常用的免疫印迹法,并明确实验操作中应注重的细节。[方法]总蛋白抽提及定量、SDSPAGE、半干转印、特异性抗体结合及ECL检测。[结果]采用本法操作简便,有很好的重复性,本实验室多次成功运用于COX2蛋白的检测。[结论]此法在本实验室多次运用,可靠、重复性强,明细实验操作细节更有利于初学者顺利地开展实验,值得应用与推广。 关键
制滴菌素A对小鼠克隆胚胎的染色体重建、DNA复制及转录活性的影响
μL转录液的电促细胞融合仪的两电极中间;采用250V/cm,80 μs,2次的参数,对胚胎进行透化,(每次透化间隔为2min)。胚胎透化后2min移入CZB中培养1h然后再移入上述转录液中。最后胚胎用4%多聚甲醛中固定,用间接免疫荧光观察转录物种掺入的BrUTP的含量。在阴性对照组的EP液、转录液、KSOM液中加入5 μg/mL 鹅膏菌素(RNA聚合酶 II和III的抑制剂)。 6. 免疫荧光显微镜检查 本次试验中使用的抗体是兔抗组蛋白H3 丝氨酸10磷酸
DNA发生反应。然后用酶标羊(或兔)抗鼠IgG抗体及相应底物进行显色。使用这一方法,可检测出单个抗原分子。材料与试剂包括: ①所测物的单克隆抗体(鼠);②所测物的多克隆抗体(兔);③生物素化羊抗鼠IgG;④生物素化羊抗兔IgG;⑤生物素化dUTP;⑥Klenow聚合酶;⑦PCR反应液;⑧引物(自行设计);⑨生物素化DNA标记分子。
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