早老素关联金属蛋白酶(PAMP)重组蛋白

重组蛋白制备工艺优化策略

对宿主细胞具有毒性，从而选择抗毒性的表达系统；怎样选择表达系统，是大肠杆菌表达系统，酵母表达系统还是CHO细胞表达系统，不同的表达系统和培养方法显著影响下游的处理过程，目标蛋白表达的定位（胞内、细胞内膜、周质空间和胞外），蛋白表达的量都依赖于所选择的表达系统；蛋白的化学性质，是否容易被蛋白酶降解，是否会和一些金属离子，化学成分发生反应；蛋白的物理性质，是否对温度敏感等。从蛋白基因的获取，蛋白基因的克隆，蛋白的表达，做好一个整体的规划，将对纯化工作的方便快捷高效带来关键的影响。基因工程构建的纯化标记

蛋白样品制备中各类杂质和杂蛋白的去除

纯化镍螯合树脂 用于分离 6XHis 标签重组蛋白，高度结合效率和低的非特异性结合。 固定的金属亲和层析树脂（IMAC）使用镍离子来纯化 6XHis 标签蛋白。树脂可以结合 6X 组氨酸残基（6XHis），一种在蛋白纯化中非常常用的标签。树脂由氨基二乙酸偶联到 6% 交联的琼脂糖上组成。氨基二乙酸可以共价结合到镍离子上，每毫升树脂可以结合 20-40μmoles 镍离子。 这种镍螯合树脂有单独的树脂也有离心柱形式供选择。 特定的结合和洗脱缓冲液液可以提供， 100 ml His 结合

Western Blot，如何成功优化？

、糜蛋白酶的高活性。不抑制凝血酶或因子XPepstatin 胃蛋白酶抑制剂抑制天冬氨酸（酸）蛋白酶如胃蛋白酶、肾素、组织蛋白酶D、凝乳 酶、许多微生物酸性蛋白酶EDTA-Na2金属蛋白酶抑制剂NaF氟化钠丝氨酸、苏氨酸磷酸酶Na3VO4原矾酸钠酪氨酸磷酸酶电泳凝胶的制备蛋白分子量 (kDa)凝胶浓度 (%)4-402012-451510-7012.515-1001025-2008内参对照内参名称分子量大小适用范围Beta-actin43kDa胞浆和全细胞GAPDH30-40kDa胞浆和全细胞