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文献和实验,并且 EST12-RACK1 诱导的细胞焦亡在 M.tb 诱导的免疫中起关键作用。 研究内容: 1、RD 区编码蛋白筛选:对 40 种 RD 区(RD1-3、11-14)重组蛋白进行筛选(巨噬细胞焦磷酸相关蛋白),通过 LDH 释放实验细胞毒性分析,发现 EST12 对巨噬细胞有显著焦解作用。 2、菌株构建:构建 M. tb H37Rv ΔEST12(Rv1579c 敲除菌株)、BCG-EST12(Rv1579c 过表达菌株)、M. smeg–EST12(Rv1579c 过表达菌株)。 3、小鼠
动物细胞系统表达和大量制备、生产。如人组织型血纤蛋白酶原激活因子、凝血因子Ⅷ、干扰素、乙肝表面抗原、红血球生成激素、人生长激素、人抗凝血素Ⅲ,集落刺激因子等。有些产品已投入临床应用或试用。 ③虽然经过多年努力,哺乳动物细胞表达系统的表达水平有大幅度增高,但从整个水平上看仍偏低,一般处在杂交瘤细胞单克隆抗体蛋白产率的下限,即1-30μg/l08细胞/24小时。有人认为其限速步骤可嚣是在工程细胞中(对于重组蛋白来讲,常是异源的),重组蛋白的分泌效率较低。 1 表达载体 1.1 表达栽体的类型
③虽然经过多年努力,哺乳动物细胞表达系统的表达水平有大幅度增高,但从整个水平上看仍偏低,一般处在杂交瘤细胞单克隆抗体蛋白产率的下限,即1-30μg/l08细胞/24小时。有人认为其限速步骤可嚣是在工程细胞中(对于重组蛋白来讲,常是异源的),重组蛋白的分泌效率较低。 1 表达载体 1.1 表达栽体的类型 哺乳动物细胞表达外源重组蛋白可利用质粒转染和病毒载体的感染。利用质粒转染获得稳定的转染细胞需几周甚至几个月时间,而利用病毒表达系统则可快速感染细胞,在几天内使外源
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