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文献和实验。尽管如此,约三分之一的SLC转运蛋白底物尚未被实验确定[4],这些孤儿SLC的底物预测和功能鉴定仍是当前SLC研究的重点方向之一。 表1 重点SLC亚家族速览 亚家族 代表成员 主要转运底物 疾病/研究方向 SLC1 SLC1A2(EAAT2)、SLC1A3(EAAT1)、SLC1A5(ASCT2)、SLC1A6(EAAT4) 兴奋性氨基酸/中性氨基酸 肿瘤代谢、免疫治疗耐药、神经退行性疾病 SLC2 SLC2A1(GLUT1)、SLC
6xHis 标签,也称为多组氨酸标签, His6 标签或 hexa 组氨酸标签, 是一种在转染的细胞中目标蛋白的 C 端或 N 端上由至少 6 个组氨酸残基链接上所组成的氨基酸序列。这种标签通常在重组蛋白的纯化中使用,这是因为组氨酸残基的序列可以在特定的缓冲液条件下结合到几种类型固定的离子上(比如镍,钴和铜)从而达到容易检测和纯化 His 标签蛋白的目的。 由于它的相对小的分子量,低的免疫原性,亲水性和在去污剂和其他添加剂存在的情况下的易变性, 因此在天然和变性的条件下,多组氨酸标签
离子,在中性和弱碱性条件下带组氨酸标签的目的蛋白与镍柱结合,在低pH下用咪唑竞争洗脱。组氨酸标签与GST相比有许多优点,首先,由于只有6个氨基酸,分子量很小,一般需要酶切去除:其次,可以在变性条件下纯化蛋白,在高浓度的尿素和胍中仍能保持结合力;另外6组氨酸标签无免疫原性,重组蛋白可直接用来注射动物,也不影响免疫学分析。虽然有这么多的优点,但此标签仍有不足,如目的蛋白易形成包涵体、难以溶解、稳定性差及错误折叠等。镍柱纯化时金属镍离子容易脱落漏出混入蛋白溶液,不但会通过氧化破坏目的蛋白的氨基酸侧链,而且柱子
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