FK506结合蛋白样蛋白(FKBPL)重组蛋白

重组蛋白纯化的基本策略

（HIC）反相（RPC） 特异性结合 亲和（AC） 每一种方法都有分辨率、处理量、速度和回收率之间的平衡。 分辨率：由选择的方法和层析介质生成窄峰的能力来实现。总的来说，当杂质和目标蛋白性质相似时，在纯化的最后阶段分辨率是重要因素。 处理量：一般指在纯化过程中目标蛋白的上样量。如上样体积、浓度等。 速度：在初纯化中是重要

一篇搞定 IP、co-IP 实验

的，但是这结果是不是假阳性呢？还得做个阴性对照。阴性对照如何设置呢？考虑到整个实验体系会出现 beads、抗X抗体、诱饵蛋白 X、靶蛋白 Y（co-IP）： 可能出现的假阳性来源 需要的阴性对照 抗 X 抗体结合非特异的蛋白 与 IP 一抗种属亚型相同的免疫球蛋白（比如，抗 X 抗体是 Mouse IgG，阴性对照可使用 Mouse 免疫球蛋白） beads 对蛋白的非特异结合* 同上，此外还可进行 Pre clear，IP 正式实验前排除非特异结合蛋白。如果使用琼脂

包涵体蛋白的复性

概要 对于基因工程技术构建的重组蛋白，通常分为可溶性重组蛋白和不溶性重组蛋白，可溶性的重组蛋白一般常常存在于细胞质内、细胞分泌到培养基、分泌到周质间隙中等。不可溶性的蛋白主要是由于表达系统的高效表达，在细胞内形成了包涵体。E.coli是应用最为广泛的重组蛋白质表达系统，但是表达的外源性蛋白多以包涵体的形式存在，为了重新获得生物活性，需要对包涵体蛋白质进行体外变复性操作。 蛋白质复性模型 根据对蛋白质折叠过程的研究，目前科学家已提出多种蛋白质复性模型，折叠漏斗模型是目前被广泛认可