一管式反转录试剂盒（50℃，含基因组DNA去除酶及buffe
r）All-in-One First-Strand Synthesis MasterMix (with dsDNase)20 ul体系- ￥500 - 1000
- 圣尔生物/share-bio
- SB-RT001
- 2025年11月11日
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- 文献和实验
- 技术资料
- 规格：
50次/100次/150次
| 规格： | 50次 | 产品价格： | ￥500.0 |
|---|---|---|---|
| 规格： | 100次 | 产品价格： | ￥650.0 |
| 规格： | 150次 | 产品价格： | ￥1000.0 |
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Ø All-in-One First-Strand Synthesis MasterMix (with dsDNase)是一款高效、便捷、减少污染的高质量一链cDNA合成试剂盒，包含M-MLV GIII Reverse Transcriptase 及其反应 Buffer、RNA 酶抑制剂、dNTPs, Oligo(dT)20VN 和随机引物等一链 cDNA 合成所需的所有组分，仅需加入RNA模板和水即可开始反应。使用该逆转录试剂盒获得的 cDNA，下游可用于qPCR、普通 PCR等实验。
Ø RNA 中存在基因组 DNA 污染，如果反转录前不做去除处理，下游进行qPCR反应时基因组DNA与cDNA会同时进行扩增，尤其是引物设计在同一外显子上时。本试剂盒采用dsDNase高效去除基因组DNA污染，区别于常规的DNase I，dsDNase能够特异性的消化双链 DNA（dsDNA以及DNA与RNA的杂合链），并且具有热敏感性，可在高温条件下快速不可逆地失活。与传统使用DNase I去除基因组DNA污染的方法相比，dsDNase无需额外加入EDTA进行失活，不仅节省实验时间，而且降低了对逆转录反应的抑制。All-in-One First-Strand Synthesis MasterMix (with dsDNase) 作为升级后的一链cDNA合成试剂盒，15分钟内最长可获得12 kb cDNA，采用去基因组DNA污染与反转录分开进行的操作方法，有效保证对RNA水平的精确定量。 |
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文献和实验System for First Strand cDNA Synthesis 试剂盒为例。 ① 在0.5ml微量离心管中，加入总RNA 1-5μg，补充适量的DEPC H2O使总体积达11μl。在管中加10μM Oligo（dT）12-18 1μl，轻轻混匀、离心。 ② 70℃加热10min，立即将微量离心管插入冰浴中至少1min。 然后加入下列试剂的混合物：10×PCR buffer 2μl；25mM MgCl2 2μl；10mM dNTPmix 1μl；0.1M DTT 2μl 轻轻混匀，离心。42℃孵育2-5
逆转录-聚合酶链反应 (Reverse Transcription-Polymerase Chain Reaction，RT-PCR
反转录RNA ，以消除RNA 模板的二级结构。 4 ．MMLV 反转录酶的RNase H- 突变体：商品名为SuperScript 和SuperScript Ⅱ。此种酶较其它酶能多将更大部分的RNA 转换成cDNA ，这一特性允许从含二级结构的、低温反转录很困难的mRNA 模板合成较长cDNA 。 二、合成cDNA 引物的选择 1 ． 随机六聚体引物：当特定mRNA 由于含有使反转录酶终止的序列而难于拷贝其全长序列时，可采用随机六聚体引物这一不特异的引物来拷贝
Preamplification System for First Strand cDNA Synthesis 试剂盒为例。 （1）在0.5ml微量离心管中，加入总RNA 1-5μg，补充适量的DEPC H2O使总体积达11μl。在管中加10μM Oligo（dT）12-18 1μl，轻轻混匀、离心。 （2）70℃加热10min，立即将微量离心管插入冰浴中至少1min。 然后加入下列试剂的混合物： 10×PCR buffer 2μl 25mM MgCl2
