- ￥7308
- Roche
- 罗氏11483188001
- 2025年11月20日
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 英文名：
First Strand cDNA Synthesis Kit for RT-PCR (AMV)
- 保质期：
见产品外包装
- 保存条件：
−20°C
- 供应商：
嵘崴达
- 库存：
需确认
- 规格：
30 REACTIONS
RT-PCR第一条链cDNA合成试剂盒（AMV）
sufficient for 30 reactions (including 5 control reactions), kit of 1 (10 components), suitable for RT-PCR, hotstart: no, dNTPs included
别名:
RT-PCR, cDNA sysnthesis
一般描述
使用AMV RT进行第一链cDNA合成具有一定优势。与M-MuLV RT相比，AMV RT具有更高的热稳定性，与在+ 37°C进行的反应相比，在+ 42°C下进行的反应，具有更高的特异性和更好的二级结构解析度。
第一链cDNA合成试剂盒以两步RT PCR用作起始反应，合成第一链cDNA。本试剂盒包含用于第一链合成的逆转录酶AMV、两种不同引物、PCR核苷酸混合物和对照 Neo pa RNA。可以使用标准程序克隆RT-PCR生成的PCR产物。
扩增RNA需要将RNA底物转化为DNA。这一过程可以通过使用逆转录酶实现，例如使用AMV RT（禽成髓细胞瘤病毒逆转录酶）或M-MuLV RT（莫洛尼氏鼠白血病病毒逆转录酶）。所得cDNA可用作标准PCR模板。
AMV RT在一个或多个位点合成新的cDNA链，而位点由所用引物的类型决定：
- 如使用Oligo-p(dT)15用作引物，则位点在聚(A)mRNA的3′端
- 如使用随机引物p（dN）6，则位点在沿着mRNA模板的非特异性点处，或
- 在由序列特异性引物确定的位点处。
特异性
热灭活：在95℃处理5min
逆转录酶AMV
应用
用于RT-PCR（AMV）的第一链cDNA合成试剂盒适用于：
- 检测是否存在RNA病毒或其他含RNA的微生物（与PCR结合使用）
- 定量mRNA，监测特定mRNA的差异表达
- “差异显示mRNA”的第一步
- 生成cDNA文库，具有大范围和全长插入片段
- 逆转录定量聚合酶链反应（RT-qPCR），将RNA逆转录成互补DNA
特点和优势
稳健性：
- 转录总RNA、mRNA和病毒RNA以及难以转录的二级RNA结构
- 获得最大12 kb的cDNA转录物
- 与M-MuLV逆转录酶相比，热稳定性（最高50°C）和特异性更好
- 无需在PCR反应之前纯化所得cDNA
灵活性：
可使用序列特异性引物、聚（dT）15引物或随机引物p（dN）6
包装
1个试剂盒包含10种组分。
| 11483188001 |
First Strand cDNA Synthesis Kit for RT-PCR (AMV) /RT-PCR第一条链cDNA合成试剂盒（AMV） |
| 11087789001 | Collagenase H, 2.5g, non-steri,胶原酶H |
| 11277049001 | Deoxynucleoside triphosphate S,脱氧核苷三磷酸S |
| 11418432001 | Taq DNA Polymerase,5units/Ál(4,Taq DNA聚合酶 |
| 11647687001 | Taq DNA Polymerase,1unit/Ál (4,Taq DNA聚合酶 |
| 10380385001 | Restr.-Endonucl. Hpa I, 100 u, |
| 11596594001 | Taq DNA Polym., 5 units/Ál (10,Taq酶高分子 |
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文献和实验合成 cDNA，产生 cDNA:RNA 复合物。该过程被称为第一链 cDNA 合成。如果存在 RNase H 活性（如野生型 AMV 和 MMLV 反转录酶），则 cDNA:RNA 复合物中的 RNA 会在第一链合成期间被切割。第一链 cDNA 可以直接用于 RT-PCR 等实验应用中，热稳定 DNA 聚合酶（如 Taq DNA 聚合酶）将复制 cDNA 的互补链。 在 cDNA 文库构建和测序中，将第一链 cDNA 作为模板，获得代表 RNA 靶标的双链 cDNA。这个过程被称为第二链cDNA 合成
液的结果相当于或优于先用反转录缓冲液合成 CDNA，然后 PCR 缓冲液进行 PCR 扩增循环。当然，值得注意的是 PCR 缓冲液并不最适合第一条 DNA 链的合成。我们对不同的缓冲液用于大片段 DNA 合成是否成功还没有进行过严格的研究。 反转录酶的选择似乎对实验方法成功与否并不十分重要。BRL 和BOEHRINGERMANN HEIM 的 MULV 反转录酶进行全面的研究，但没有理由认为来源可靠的反转录酶不能适用 于该方法。在研究中，我们仅使用了PERKINELMER/CETUS 公司生产
合酶活性相互竞争RNA模板与DNA引物或cDNA延伸链间形成的杂合链，并降解RNA：DNA复合物中的RNA链。被RNaseH活性所降解的RNA模板不能再作为合成cDNA的有效底物，降低了cDNA合成的产量和长度。因此消除或大大降低逆转录酶的RNaseH活性将会大有裨益。SuperScriptⅡ逆转录酶，RNaseH- 的MMLV逆转录酶及ThermoScript逆转录酶，RNaseH- 的 AMV，比MMLV和AMV得到更多量和更多全长的cDNA（图3）。RT-PCR灵敏度会受cDNA合成量的影响
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