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普通PCR
服务介绍:从鼠的尾巴、耳朵、脚趾等组织快速提取基因组DNA,通过PCR扩增、凝胶电泳的方法快速鉴定基因型,即野生型、杂合子、突变型。或者基因组水平上由单个核苷酸的变异所引起的DNA序列多态性分析,即SNP实验。
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名称 |
规格 |
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普通PCR |
/基因/样 |
取材-提取DNA或提取RNA逆转录成cDNA-引物设计合成-PCR扩增-电泳-出报告
送样运输要求:
动物组织:100 mg(黄豆大小),最少50 mg(绿豆大小),脂肪组织,结缔组织,纤维化组织适当增加,干冰运输。
细胞:1×10^6个细胞。细胞沉淀或加入trizol的细胞样本(不要直接运输加trizol的细胞培养皿),干冰运输。
全血:最少1 mL新鲜血液EDTA抗凝管,-20℃运输。
植物:新鲜的叶、果肉、种子等最少需100 mg,干冰运输。
cDNA和基因组DNA,干冰运输。
大于5mm的鼠尾;大于10mm^2耳朵;大于2个脚趾;干冰运输;提供基因型鉴定引物或引物序列信息。
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文献和实验普通PCR
叮当儿 各位大侠,小妹要对HCE细胞的Toll样4受体做检测,但是细胞自身表达量太低,正常细胞提取RNA之后做逆转录都没有结果,而且我还要对其表达进行干扰,转染shRNA进去,结果就是做pcr时更没有结果了(内参很好),PCR反应条件如下: 20ul volum cDNA loading 3ul 10xtaq buffer 2ul dNTPs(2.5/each) 2ul Mg
Rate 3.35 ºC/Sec Enabled to run FAST Chemistry Yes Temperature Accuracy ±0.25 ºC (35 ºC – 99.9 ºC) Temperature Range 4.0 ºC to 99.9 ºC Temperature Uniformity Weight 10.6 kg (19.9lb) PCR Volume Range 10-80 µL Instrument Memory USB
realtime PCR 在PCR体系中加有sybr green或者探针,普通的RT-PCR则没有。realtime PCR上机后从电脑上直接读出结果,普通的RT-PCR需要跑胶、紫外线下观察结果或用凝胶成像系统分析。realtime PCR一次测多种mRNA表达需要多色荧光,这就需要仪器支持多色荧光并且探针用不同荧光标记。普通的RT-PCR,可以采取双重PCR的方法同时检测2种mRNA表达。
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