Human VEGF ELISA KIT 人的血管内皮生

VEGF简介：

VEGF属于PDGF因子家族，是A、B、C、D四种亚类的一类因子的总称，它们在血管发生过程中起重要作用。其中在血管再生和内皮细胞的再生过程中，VEGF-A扮演重要的角色。现已发现VEGF-A有许多种因切割后氨基酸数不同的亚型，其中含有的肝磷脂接合区域，能与胞外基质内的肝磷脂结合，以VEGF165量最多。VEGF-A可由多种细胞分泌的分子量为45kDa的糖蛋白。

VEGF的功能主要表现在伤口的愈合和女性生殖周期循环上。在病理组织中，VEGF能提升血管通透性。这就是肿瘤的转移和肿瘤复发的基础。在胚胎期，VEGF的作用表现为调控胚胎细胞的增殖、转移和提高内皮细胞的存活力上，通过成骨细胞和成软骨细胞的募集作用提升骨形成的效率。VEGF-A的功能还表现在一些如血管再生和血管通透相关联的生理过程中。肿瘤释放的细胞因子和生长因子能刺激骨髓中的巨核细胞分裂为血小板，这样就间接增加了VEGF-A向肿瘤的迁移。

骨组织、心肌、肝实质、成骨细胞、中性粒细胞、巨噬细胞、角化细胞、棕色脂肪组织、CD34+干细胞、内皮细胞、成纤维细胞和血管平滑肌细胞等细胞和组织均可表达 VEGF。

人VEGF定量分析酶联免疫检测试剂盒  灵敏度：多次重复结果表明，最小检出量为29.4pg/ml。

灵敏度，特异性和重复性:

1.灵敏度：多次重复结果表明，最小检出量为29.4pg/ml。

2.特异性：与人PLGF、VEGF-C、VEGF-D、小鼠 PLGF-2、VEGF120、VEGF164和大鼠VEGF164等没有交叉反应。

3.重复性：板内，板间变异系数均<10%.

参考文献:

Robinson, C.J. and S.E. Stringer (2001) J. Cell. Sci. 114:853.

Richardson, R.S. et al. (1999) Am. J. Physiol. 277:H2247.

Mclaren, J. et al. (1996) J. Clin. Invest. 98:482.

Bautz, F. et al. (2000) Exp. Hematol. 28:700.

Namiki, A. et al. (1995) J. Biol. Chem. 270:31189.

Kowalewski, M.P. et al. (2005) Accession #ABB82619.

 

人VEGF定量分析酶联免疫检测试剂盒组成:

标本收集:

1.标本的收集请按下列流程进行操作；

A.细胞上清标本离心去除悬浮物后即可；

B.血清标本应是自然凝固后，取上清，避免在冰箱中凝固血液；

C.血浆标本，推荐用EDTA的方法收集；

D.若待测样本不能及时检测，标本收集后请分装，冻存于－20℃，避免反复冻融。

2.血清标本不应添加任何防腐剂或抗凝剂；

3.标本应清澈透明，检测前样本中如有悬浮物应通过离心去除。

4.请勿使用溶血，高血脂或污染的标本检测，否则结果将不准确。

注：人血清或血浆样本请用样本分析缓冲液做倍比稀释后再检测。

 

操作步骤:

1.通过计算并确定一次性实验所需的板条数，取出所需板条放置在框架内，暂时用不到板条请放回铝箔袋密封，保存于4℃。

2.建议设置本底较正孔，即空白孔,设置方法为该孔只加TMB显色液和中止液。每次实验均需做标准品对照并画出标准曲线。

3. 分别将样品或不同浓度标准品按照100μl/孔加入相应孔中，用封板膜封住反应孔，室温（25-28℃）孵育120分钟。对于血清血浆样本，先加50ul的样本分析缓冲液，再加50uL样本。如检测超出范围，请先加50ul的样本分析缓冲液，再加用标准品稀释液稀释后的样本50μl检测。请注意记录好样品的稀释倍数，此处加样量50ul相当于已稀释了2倍。     

4.洗板5次，且最后一次置厚吸水纸上拍干。

5.加入生物素化抗体工作液(100ul/孔)。用封板胶纸封住反应孔，室温(25～28℃)孵育60分钟。    

6.洗板5次，且最后一次置厚吸水纸上拍干。

7.加入亲和素连接的HRP酶工作液(100ul/孔)。用封板胶纸封住反应孔，避光室温(25～28℃)孵育20分钟。

8.洗板5次，且最后一次置厚吸水纸上拍干。

9.加入显色剂TMB100ul/孔，避光室温(25～28℃)孵育20分钟。

10.加入终止液50ul/孔,混匀后即刻测量OD450值。

结果判断:

1.复孔的值在20%的差异范围内结果才有效，复孔的值平均后可作为测量值。

2.每个标准品或标本的OD值应减去本底校正孔的OD值。

3.手工绘制标准曲线。以标准品浓度作横坐标，OD值作纵坐标，以平滑线连接各标准品的坐标点。通过标本的OD值可在标准曲线上查出其浓度。

4.若标本OD值高于标准曲线上限，应适当稀释后重测，计算浓度时应乘以稀释倍数。