Human IL-17 ELISA KIT 人白细胞介素1

IL-17简介：

白介17，是一类新的细胞因子家族，一般是由一个二硫键连接的同型二聚体。每个肽链含有155个氨基酸残基，分子量约为17.5kDa。白介17家族共有六个成员，其中具同型二聚体结构，分子量约为32kDa的白介17A主要由活化的T记忆细胞产生，刺激机体的免疫。

许多证据都表明IL-17具有调控免疫反应的功能。IL-17调控T细胞造血系统细胞间的通讯已被证明。T细胞产生的IL-17通过NF-κB通路的作用，诱导成纤维细胞产生IL-17, IL-8, ICAM-1 和G-CSF等细胞因子。IL-17也可通过刺激T细胞来提高T细胞本身的扩增和提高在骨关节炎患者软骨中NO水平的增高。

最近的研究表明，IL-17家族的细胞因子在炎症性疾病、自身免疫病和肿瘤等发生中均有重要的作用。几种如气管炎、类风湿性关节炎、腹膜炎引起的粘连和脓肿、肠炎、异体移植、牛皮癣、肿瘤和几种硬皮病等疾病中都检测出IL-17表达水平的提高。IL-17调节通路在关节软骨、骨、半月板、脑、造血组织、肾、肺、皮肤和肠中都起着重要的作用，表明IL-17在这类组织中不仅是免疫作用，而且在该类组织的正常和病态的平衡间扮演一个重要的作用。

人IL-17定量分析酶联免疫检测试剂盒组成:

标本收集:

1.标本的收集请按下列流程进行操作；

A.细胞上清标本离心去除悬浮物后即可；

B.血清标本应是自然凝固后，取上清，避免在冰箱中凝固血液；

C.血浆标本，推荐用EDTA的方法收集；

D.标本收集后请分装，若待测样本不能及时检测，冻存于－20℃，避免反复冻融。

2.血清标本不应添加任何防腐剂或抗凝剂；

3.标本应清澈透明，检测前样本中如有悬浮物应通过离心去除。

4.请勿使用溶血，高血脂或污染的标本检测，否则结果将不准确。

 

操作步骤:

1.通过计算并确定一次性实验所需的板条数，取出所需板条放置在框架内，暂时用不到板条请放回铝箔袋密封，保存于4℃。

2.建议设置本底较正孔，即空白孔,设置方法为该孔只加TMB显色液和中止液。每次实验均需做标准品对照并画出标准曲线。

3. 分别将样品或不同浓度标准品按照100μl/孔加入相应孔中，用封板膜封住反应孔，室温（25-28℃）孵育120分钟。对于血清血浆样本，先加50ul的样本分析缓冲液，再加50uL样本。如检测超出范围，请先加50ul的样本分析缓冲液，再加用标准品稀释液稀释后的样本50μl检测。请注意记录好样品的稀释倍数，此处加样量50ul相当于已稀释了2倍。    

4.洗板5次，且最后一次置厚吸水纸上拍干。

5.加入生物素化抗体工作液(100ul/孔)。用封板胶纸封住反应孔，室温（25～28℃）孵育60分钟。   

6.洗板5次，且最后一次置厚吸水纸上拍干。

7.加入亲和素连接的HRP酶工作液(100ul/孔)。用封板胶纸封住反应孔，避光室温（25～28℃）孵育20分钟。

8.洗板5次，且最后一次置厚吸水纸上拍干。

9.加入显色剂TMB100ul/孔，避光室温（25～28℃）孵育20分钟。

10.加入终止液50ul/孔,混匀后即刻测量OD450值。

 

结果判断:

1.复孔的值在20%的差异范围内结果才有效，复孔的值平均后可作为测量值。

2.每个标准品或标本的OD值应减去本底校正孔的OD值。

3.手工绘制标准曲线。以标准品浓度作横坐标，OD值作纵坐标，以平滑线连接各标准品的坐标点。通过标本的OD值可在标准曲线上查出其浓度。

4.若标本OD值高于标准曲线上限，应适当稀释后重测，计算浓度时应乘以稀释倍数。

本司ELISA试剂盒优势：

灵敏度，特异性和重复性:

1.灵敏度：多次重复结果表明，最小检出量为11.3pg/ml。

2.特异性：与人IFN-γ、 IL-10、 IL-12、IL-16、IL-17B、 IL-17C、IL-17D、IL-17F，小鼠 IL-17等没有交叉反应。

3.重复性：板内，板间变异系数均<10%.

参考文献：

1. Hymowitz, S.G. et al. (2001) EMBO J. 20:5332.

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3. Yao, Z. et al. (2005) Immunity 3:811.

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5. Cua, D.J. and C.M. Tato (2010) Nat. Rev. Immunol. 10:479..

6. Hu, Y. et al. (2010) J. Immunol. 184:4307.

7. Khader, S.A. and R. Gopal (2010) Virulence 1:423.

8. Milovanovic, M. et al. (2010) J. Invest. Dermatol. 130:2621