Human IL-13 ELISA KIT 人白细胞介素1

组分	规格（96T/48T）
人IL-13预包被板	12条/6条
样本分析缓冲液	5ml/3ml
标准品稀释液	10ml/5ml
人IL-13标准品	4支/2支(冻干)*
人IL-13生物素化抗体	10ml/5ml
亲和素连接的HRP酶	10ml/5ml
浓缩洗涤液 20×	30ml/15ml
TMB底物	10ml/5ml
中止液	5ml/3ml
封板胶纸	3/2张
说明书	1份

 

操作步骤:

1.通过计算并确定一次性实验所需的板条数，取出所需板条放置在框架内，暂时用不到板条请放回铝箔袋密封，保存于4℃。

2.建议设置本底较正孔，即空白孔,设置方法为该孔只加TMB显色液和中止液。每次实验均需做标准品对照并画出标准曲线。

3. 分别将样品或不同浓度标准品按照100μl/孔加入相应孔中，用封板膜封住反应孔，室温（25-28℃）孵育120分钟。对于血清血浆样本，先加50ul的样本分析缓冲液，再加50uL样本。如检测超出范围，请先加50ul的样本分析缓冲液，再加用标准品稀释液稀释后的样本50μl检测。请注意记录好样品的稀释倍数，此处加样量50ul相当于已稀释了2倍。   

4.洗板5次，且最后一次置厚吸水纸上拍干。

5.加入生物素化抗体工作液(100ul/孔)。用封板胶纸封住反应孔，室温（25～28℃）孵育60分钟。    

6.洗板5次，且最后一次置厚吸水纸上拍干。

7.加入亲和素连接的HRP酶工作液(100ul/孔)。用封板胶纸封住反应孔，避光室温（25～28℃）孵育20分钟。

8.洗板5次，且最后一次置厚吸水纸上拍干。

9.加入显色剂TMB100ul/孔，避光室温（25～28℃）孵育20分钟。

10.加入终止液50ul/孔,混匀后即刻测量OD450值。

 

结果判断:

1.复孔的值在20%的差异范围内结果才有效，复孔的值平均后可作为测量值。

2.每个标准品或标本的OD值应减去本底校正孔的OD值。

3.手工绘制标准曲线。以标准品浓度作横坐标，OD值作纵坐标，以平滑线连接各标准品的坐标点。通过标本的OD值可在标准曲线上查出其浓度。

4.若标本OD值高于标准曲线上限，应适当稀释后重测，计算浓度时应乘以稀释倍数。

 

灵敏度，特异性和重复性:

1.灵敏度：多次重复结果表明，最小检出量为89.3pg/ml。

2.特异性：与人IL-1α,IL-1β,IL-1ra,IL-2,IL-3,IL-4,IL-5,IL-6,IL-7,IL-8,IL-9,IL-10,IL-12等没有交叉反应。

3.重复性：板内，板间变异系数均<10%.

 

参考文献:

1. Zurawski, G. and J.E. de Vries (1994) Immunol. Today 15:19.

2. Hilton, D.J. et al. (1996) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 93:497.

3. Lin, J-X. et al. (1995) Immunity 2:331.

4. Zurawski, S.M. et al. (1995) J. Biol. Chem. 270:13869.