胞内因子固定破膜剂

细胞内细胞因子染色步骤

能和 FcγR Ⅲ/Ⅱ结合，封闭非特异性染色，使阴性细胞的背景荧光降至未标记细胞的水平。加入 0.5-1μg 纯的抗小鼠 CD16/32 单克隆抗体，室温孵育 10min。 对于人和大鼠，可直接使用过量的与荧光抗体相同来源和亚型的纯化 Ig 或者与目标种属相同来源血清进行阻断，或者用商业化的 Fc 受体阻断剂。 五、细胞表面抗体孵育 根据实验设计，除空白对照外，对应的单染管、全染管加入相应的抗体 5μL，混匀，4℃ 避光孵育 30min。 六、固定破膜 按照说明书稀释固定破膜液。 每管加入

Elabscience流式克隆号选对不踩坑：6 大场景一次说清！

缺一不可。   场景三：固定破膜后的胞内/核内抗原检测——警惕构象表位的丢失 检测胞内或核内抗原（如细胞因子、转录因子Foxp3、T-bet等）时，样本必须经过固定和破膜处理，使抗体得以进入细胞膜甚至细胞核内部。该处理过程会改变抗原蛋白的天然构象，甚至破坏线性表位的完整性，因此并非所有适用于表面染色的克隆号都能胜任胞内检测任务。 在胞内抗原检测中，克隆号的选择必须优先考虑经过固定破膜染色验证的抗体。Foxp3作为核心转录因子需经过固定破核膜处理后才能被抗体识别，一旦破膜效果不佳或所选克隆号在固定条件

献给初学者：流式细胞术，你会处理样本么？

L PE CD4/106 细胞，震荡混匀，4℃ 避光孵育 30 min（或室温避光 15 min）。6. 用 Wash Buffer 液洗涤，1500 rpm 离心 5 min，弃上清。7. 打孔或者加入 200 μL 1% PFA（多聚甲醛）固定过夜。三. 胞内染色1. 将全部管细胞固定打孔。每管加入 150 μL 固定破膜剂，震荡混匀，4℃ 避光孵育 20 min。2.ICS Wash Buffer 液洗涤，用法同 Wash Buffer 液。3. 在相应的需要进行胞内染色的样本中加入适当量胞内