EdU染色

EdU染色

服务介绍：

EdU（5-Ethynyl-2’- deoxyuridine）是一种胸腺嘧啶核苷类似物，能够在细胞增殖时期代替胸腺嘧啶（T）渗入正在复制的DNA分子中，通过基于EdU与Apollo®荧光染料的特异性反应快速检测细胞DNA复制活性，适用于细胞增殖、细胞分化、生长与发育、DNA修复、病毒复制、细胞标记示踪等方面。

 

 

 

 

实验流程：

1 每孔加入100μL渗透剂(0.5% TritonX-100的PBS)脱色摇床孵育10分钟；PBS清洗1次，5分钟。

2每孔加入100 μL的EDU染色反应液（配置比例见下表），避光、室温、脱色摇床孵育30分钟后，弃染色反应液；

 

3染核：爬片置于PBS（PH7.4）中在脱色摇床上避光晃动洗涤3次，每次5min。切片稍甩干后滴加dapi染液，或hochest染液室温避光染核10min。

4封片：爬片用PBS（PH7.4）洗涤3次，每次5min。爬片稍甩干后将有细胞的一面朝下用抗荧光淬灭封片剂将玻片封固在载玻片上封片。

5 镜检拍照：切片于尼康正置荧光显微镜下观察并采集图像。（紫外激发波长330-380nm，发射波长420nm；FITC绿光激发波长465-495nm，发射波长515-555 nm；555红光激发波长550nm，发射波长590nm）

结果判读：

DAPI染出来的细胞核在紫外的激发下为蓝色，阳性表达为相应荧光素标记的红光或者绿光

送样运输要求：

1.组织样本放置于20倍样本体积的固定液中固定24h以上，常温运输送样。

2.石蜡切片常温保存运输

3.冰冻切片-20℃保存运输

4.细胞爬片PFA固定15min后用无菌PBS洗涤后用无菌PBS浸泡，4℃冰袋保存运输到实验室。

注意事项：

1.检测之前需动物活体注射化学试剂EdU，细胞需用化学试剂EdU处理造模，否则无阳性。