- ￥539 - 784
- 贝斯杰生物
- D909
- 北京
- 2025年07月10日
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 库存：
50+
- 保质期：
15个月
- 供应商：
北京贝斯杰生物科技有限公司
- 保存条件：
室温
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柱平衡步骤：向吸附柱ZTS中 (吸附柱放入50 ml收集管中) 加入2.5 ml Buffer BL，8,000 rpm (～8,228×g)离心2 min，倒掉收集管中的废液，将吸附柱重新放回收集管中。(用平衡液处理过的柱子最好立即使用)。
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取100 ml（根据培养菌体的浓度选择合适的量，低拷贝推荐用200 ml）过夜培养的菌液加入离心管，室温8,000 rpm (～8,228×g)离心3 min收集细菌，尽量吸除上清。
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尽量吸除上清，为确保上清液全部吸取，请用干净的吸水纸吸去瓶壁上的水滴。
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向留有菌体沉淀的离心管中加入8 ml Buffer P1 (请先检查是否已加入RNase A)，使用涡旋振荡器彻底悬浮细菌细胞沉淀。
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向离心管中加入8 ml Buffer P2，立即温和地上下翻转8次，使菌体充分裂解，室温放置5 min。
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向离心管中加入8 ml Buffer P4，立即温和地上下翻转8次，充分混匀，至溶液出现白色分散絮状沉淀，然后室温放置10 min。8,000 rpm (～8,228×g)离心5 min，将上清小心倒入过滤器GS2中，慢慢推动推柄过滤，滤液收集在干净的带刻度的50 ml离心管中（需自备）。
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向滤液中加入0.3倍滤液体积的异丙醇 (加入异丙醇过多容易导致RNA污染)，上下颠倒混匀后转移到吸附柱ZTS中 (吸附柱放入50 ml收集管中)。
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8,000 rpm (～8,228×g)离心2 min，倒掉收集管中的废液，将吸附柱重新放回收集管中。
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向吸附柱中加入10 ml Buffer DW2 (请检查是否已加入无水乙醇)，8,000 rpm(～8,228×g)离心2 min，弃掉收集管中的废液，将吸附柱重新放回收集管中。
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重复操作步骤9。
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8,000 rpm (～8,228×g)离心2 min，目的是将吸附柱中残余的漂洗液去除。用枪头吸除内圈压环和柱壁之间可能残留的乙醇，打开盖子室温晾干3-5 min。
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将吸附柱置于一个干净的50 ml收集管中，打开盖子室温晾干5 min，向吸附膜中间部位悬空滴加1-2 ml Buffer EB (Buffer EB需在65℃水浴中预热3-5 min)，室温放置5 min，然后8,000 rpm (～8,228×g)离心2 min。将50 ml离心管中洗脱液全部转入一个干净的1.5 ml离心管，-20℃保存。
可选步骤（如果需要更高浓度的质粒，可进行如下操作）
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每1 ml洗脱液加入1.42 ml异丙醇以及0.42 ml 5M NaCl (客户自备)，混匀，室温放置5 min，8,000 rpm离心10 min，小心弃上清。
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加入0.5 ml的70%乙醇洗涤沉淀，室温8,000 rpm离心5 min，小心弃乙醇。
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重复操作步骤2。
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空气中干燥沉淀约5-10 min，根据需要用适当体积的Buffer EB溶解沉淀。
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文献和实验CRISPR/Cas9 基因敲除实验-- sgRNA 及引物设计
来看一下。提交订单，等待引物到达：华大基因的速度非常快，大约在 2 - 3 个工作日即可拿到，在等待期间需要准备好：LB + 抗生素抗性平板；感受态细胞及相应培养基；无内毒素的 Cas9 载体质粒；BbsI 限制性内切酶；质粒小提试剂盒；常规限制性内切酶。
常规用于ELISA实验的样本包含血清、血浆、细胞培养上清、尿液以及组织匀浆等。不同样本类型的预处理方法存在差异，合适的样本预处理是确保ELISA实验正确性和准确性的第一步。这里，我们将介绍几种不同样本类型的处理方法。 血清 血清是ELISA实验最常用的样本，其预处理也十分简单。 使用无热原无内毒素的试管或离心管采集血液样本，将试管或离心管在室温下放置1小时或4℃过夜，分离出血清（建议倾斜试管或离心管以扩大液面的横截面，使血清可以更大程度地分离出来）。2-8℃下以1000×g离心20分钟
只适合酶切测序等。而我用无内毒素大提试剂盒时，就没出现这种情况，溶度有1000多微克每毫升。所以，建议：1.要转染最好就用无内毒素大提试剂盒2.已小提，想纯化滤菌用于转染建议参考“将质粒溶液进行浓缩，每50微升质粒溶液加2微升5mol/L NaC1混匀，冷的无水乙醇沉淀质粒，10 000r/min离心5min，弃去上清，用70% 的乙醇洗1次，无菌条件下真空干燥，以灭菌生理盐水溶解质粒至质量浓度为1 微g/微L，一20度保存。质粒转染前，行酶切及测序鉴定。”
