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- 上海
- 2026年01月16日
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 提供商：
瓦兰生物
- 服务名称：
质粒
- 规格：
2ug
PAAV-zsgreen-shRNA货号：JN040500057
质粒使用方法
1.液体质粒（-20°保存，保质期90天）
①收到液体质粒后请瞬离样晶筐，让液体质粒不要吸附在营壁上；
②取出感受态细胞于冰上融化，取2µl的质拉稀释液加到lOOµl感受态细胞里，；水浴30min;
③42。 C水浴热激60-905，再冰浴Smin，加入700µl的无抗培养基，37 。培养箱180rpm培养30min;
④SOOOrpm离心3min，倒掉上清，留下lOOµl左右的上清轻打重悬沉淀，均匀的涂布在对应抗性的LB平板上；
⑤倒置培养过夜后，挑取单个菌落到对应抗性的LB液体培养基申过夜37。培养箱180rpm培养，根据实验需求抽提DNA。
⑥注意事项：倒置过夜培养若没有菌落生长，可取lOµl的质粒稀释液重复上述实验过程；若菌落太多，则质粒稀释10倍后重复上述实验过程。
2.甘油菌种（－80°保存，保质期90天）
①在洁净台用酒精灯将接种环烧热晾；京后，蘸取甘油菌种在对应抗性的固体培养皿上四区划线；
②挑取线上的单个菌落接种到对应液体培养基申；
③根据实验需求在37。培养箱180rpm培养，根据实验需求抽提DNA。
3.穿刺菌种（40保存，保质期7天）
①拿到的穿刺菌可以看到明显的穿刺线，挑取穿剌线上的菌接种到相应的培养墓中，液体培养后四区划线，挑取线上的单个克隆到对应液体培养基中， 根据实验需求在37。培养箱 180rpm培养，根据实验需求抽提DNA。
4.培养皿菌种（4°保存，保质期7天）
①直接挑取单个菌落培养。
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文献和实验暂无文献
但感觉自己包装效率还是不太高，做起来不好弄 kinguangjun 你可以考虑clontech的pLVX-ShRNA2和pLVX-IRES-ZsGreen1慢病毒系统，比invitrogen的慢病毒系统要高两个数量级以上，我们实验室一直都用这个系统。 jinanfendou 看你做什么实验了，慢病毒载体系统很多公司有卖的，但是你自己包装的话，滴度可能达不到这么高，好转染的细胞还是可以的，但是要是难转染的细胞和动物
-C1 pEGFPC1 表达 绿色 荧光蛋白和目的基因的融合蛋白，目的基因位于C端 kan/neo 4.7kb E. coli/mammals pEGFP-C2 pEGFPC2表达 绿色 荧光蛋白和目的shRNA的融合蛋白，目的基因位于C端 kan/neo 4.7kb E. coli/mammals pEGFP-C3 pEGFPC2表达 绿色 荧光蛋白和目的shRNA的融合蛋白，目的基因位于C端 kan/neo 4.7kb E. coli/mammals pSUPER-EGFP
PYM30 ECGP PYM33 EBFP PYM39 EYFP pLVX-ShRNA1 pLVX-puro PLVX-ires-zsgreen1 PLVX-acgfp-n1 PLVX-dsred-monomer-n1
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