pAAV-EnCMV-TATAlox-U6-shRNA-EG

pAAV-EnCMV-TATAlox-U6-shRNA-EGFP货号：JN050500076

【保存与扩增】1.保存：质粒置于-20°C 保存，穿刺菌置于 4°C 保存2.质粒扩增：收到质粒后离心，-80°C 取出感受态细胞，取 1uL 质粒加至 100ul 感受态中，冰浴30min；42°C热击90s，再冰浴 2min，混合液体直接涂板，倒置培养 12-16h，挑单克隆至液体培养基中，震荡12-16h，提取质粒。3. 菌液扩增： 经划线培养后挑克隆至相应抗性 LB 培养基中。

 【注意事项】 本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内。 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。 【

使用说明】首次使用 2µg 包装的本产品时，请先取少量本质粒转化大肠杆菌，进行质粒小量、中量或大量抽提后再用于后续用途。抽提获得的质粒可以通过酶切电泳进行鉴定，或通过测序进行鉴定。

质粒使用方法

1.液体质粒（-20°保存，保质期90天）

①收到液体质粒后请瞬离样晶筐，让液体质粒不要吸附在营壁上；

②取出感受态细胞于冰上融化，取2µl的质拉稀释液加到lOOµl感受态细胞里，；水浴30min;
③42。 C水浴热激60-905，再冰浴Smin，加入700µl的无抗培养基，37 。培养箱180rpm培养30min;
④SOOOrpm离心3min，倒掉上清，留下lOOµl左右的上清轻打重悬沉淀，均匀的涂布在对应抗性的LB平板上；
⑤倒置培养过夜后，挑取单个菌落到对应抗性的LB液体培养基申过夜37。培养箱180rpm培养，根据实验需求抽提DNA。
⑥注意事项：倒置过夜培养若没有菌落生长，可取lOµl的质粒稀释液重复上述实验过程；若菌落太多，则质粒稀释10倍后重复上述实验过程。
2.甘油菌种（－80°保存，保质期90天）
①在洁净台用酒精灯将接种环烧热晾；京后，蘸取甘油菌种在对应抗性的固体培养皿上四区划线；
②挑取线上的单个菌落接种到对应液体培养基申；
③根据实验需求在37。培养箱180rpm培养，根据实验需求抽提DNA。
3.穿刺菌种（40保存，保质期7天）
①拿到的穿刺菌可以看到明显的穿刺线，挑取穿剌线上的菌接种到相应的培养墓中，液体培养后四区划线，挑取线上的单个克隆到对应液体培养基中， 根据实验需求在37。培养箱 180rpm培养，根据实验需求抽提DNA。
4.培养皿菌种（4°保存，保质期7天）
①直接挑取单个菌落培养。