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基因组学之16s、18s、ITS等扩增子测序

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  • 2026年01月15日
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    基因组研究包括两方面的内容:以全基因组测序为目标的结构基因组学(structural genomics)和以基因功能鉴定为目标的功能基因组学(functional genomics),又被称为后基因组(postgenome)研究,是系统生物学的重要方法。

    在医学领域,基因组学能为一些疾病提供新的诊断、治疗方法,有助于医生获得更多的治疗信息并进行个性化医疗。在食品、农业、环境等研究领域,基因组学的应用也十分广泛。基因组学的主要工具和方法包括生物信息学,遗传分析,基因表达测量和基因功能鉴定。

     

    一、16s、18s、ITS等扩增子测序:

    扩增子测序是对特定长度的PCR产物或捕获的片段进行测序,分析序列中的变异。16S/18S/ITS等扩增子测序即通过提取环境样品的DNA,选择合适的通用引物扩增16S/18S/ITS的目标区域,通过检测目标区域的序列变异和丰度,以研究环境微生物多样性及群落组成差异。

     

    二、技术优势:

    1、通量高,适用于大量样本的特定基因组区域研究;

    2、周期短,可缩短研究周期,加速临床应用及文章发表;

    3、信息度高,针对感兴趣的基因组区域进行遗传变异位点的寻找,可对特定区域进行深入研究。

     

    三、实验路线:

    (1)样品准备;

    (2)DNA提取与检测;

    (3)PCR扩增;

    (4)产物纯化;

    (5)文库制备与产检;

    (6)Hiseq上机测序。

     

    四、生物信息学分析:

    图片

    五、应用领域:

    环境微生物、肠道微生物、发酵微生物菌群研究等。

     

    六、样品要求:

    样品类型

    样品量

    样品要求

    常见环境样本

    土壤、淤泥、沉积物

    ≥3g

    建议使用5ml EP 管进行装载

    粪便

    ≥500mg

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    水样(过滤后的滤膜拭子)

    ≥2个

    最适滤膜直径3-4cm,孔径大小一般选择0.22um或者0.45um

    组织样本

    肠道组织等

    ≥1g

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    DNA/PCR产物

    DNA(浓度≥5ng/ul)

    ≥150ng

    DNA要有明显主带,无降解,无RNA、蛋白质等杂质污染

    PCR产物(浓度≥20ng/ul)

    ≥400ng

    片段大小<450bp,条带单一,无降解,无引物二聚体

    图片

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