- ￥600 - 3200
- 上海莼试
- CS-01Y68230
- 国产
- 2025年07月15日
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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 库存：
51
- 英文名：
Dichlorphenamide-13C6
- CAS号：
1391054-76-4
- 供应商：
上海莼试
- 保存条件：
Store at -20°C
- 规格：
1 mg
本产品仅供科学实验研究使用! 不能用于临床或动物诊断！
化学性质:
Dichlorphenamide-13C6规格：1 mg
CAS：1391054-76-4
别名：N/A
化学名：N/A
分子式：[13C]6H6Cl2N2O4S2
分子量：311.1
溶解度：Chloroform: slightly soluble,DMSO: slightly soluble
储存条件：Store at -20°C
General tips：For obtaining a higher solubility , please warm the tube at 37 ℃ and shake it in the ultrasonic bath for a while.
Shipping Condition: Evaluation sample solution : ship with blue ice All other available size: ship with RT , or blue ice upon request
产品描述:
Dichlorphenamide-13C6 is intended for use as an internal standard for the quantification of dichlorphenamide by GC- or LC-MS. Dichlorphenamide is a sulfonamide and an orally bioavailable carbonic anhydrase (CA) inhibitor (Kis = 1.20, 38, 50, and 50 nM for the human CA isoforms CAI, CAII, CAIX, and CAXII, respectively).1 It lowers intraocular pressure in rabbits when 50 µl of a 10% solution is applied topically to the eye.2 Dichlorphenamide rescues the potassium deficiency and prevents insulin-induced paralysis in a rat model of familial hypokalemic periodic paralysis when administered at a dose of 5.6 mg/kg per day for ten days.3 Formulations containing dichlorphenamide have been used in the treatment of glaucoma and primary periodic paralysis.
使用方法:
1. 常用筛选浓度
注意：用来筛选稳转株的工作浓度需要根据细胞类型，培养基，生长条件和细胞代谢率而变化，推荐使用浓度为50-1000μg/mL。对于第一次使用的实验体系建议通过建立杀灭曲线(kill curve)，即剂量反应性曲线，来确定最佳筛选浓度。
一般而言，哺乳动物细胞50-500μg/mL;细菌/植物细胞20-200μg/mL;真菌300-1000μg/mL。
2. 杀灭曲线的建立
注意：为了筛选得到稳定表达目的蛋白的细胞株，需要确定能够杀死未转染宿主细胞的抗生素浓度，可通过建立杀灭曲线(剂量反应曲线)来实现，至少选择5个浓度。
1) 第一天：未转化的细胞按照20-25%的细胞密度铺在合适的培养板上，37℃，CO2培养过夜;注：对于需要更高密度来检测活力的细胞，可增加接种量。
2) 根据细胞类型，设定合适范围内的浓度梯度。以哺乳动物细胞为例，可设定50，100，250，500，750，1000μg/mL。先用去离子水或者PBS buffer按照1:10的比例将母液稀释到5 mg/ml，然后按照下表稀释到相应浓度的工作液。
3) 第二天：替换旧的培养基，换用新鲜配制的含有相应浓度药物的培养基。每个浓度做三个平行孔。
4) 接下来每3-4天更换新的含药物培养基。
5) 按照固定的周期(如每2天)进行活细胞计数来确定阻止未转染细胞生长的恰当浓度。选择在理想的天数(通常是7-10天)内能够杀死绝大多数细胞的浓度为稳定转染细胞筛选用的工作浓度。
3. 稳定转染细胞的筛选
1) 转染48h后，用含有适当浓度的潮霉素B筛选培养基来传代细胞(直接传代或者稀释后传代)。
注意：细胞处于活跃分裂状态时抗生素的杀伤。则当细胞过于稠密，其效率会降低。为了得到较好的筛选效果，最好将细胞稀释至丰度不超过25%
2) 每隔3-4天更换含有药物的筛选培养液。
3) 筛选7天后观察并评估细胞克隆(集落)的形成情况。集落的形成可能还需要一周或者更多的时间，这取决于宿主细胞类型，转染，以及筛选效果。
4) 挑取并转移5-10个抗性克隆于35mm细胞培养板，继续用含药物的筛选培养液维持培养7天。
5) 之后更换正常培养基培养即可。
公司正在出售的产品:
蛋白酶抑制剂混合物实验步骤:
(1)实验开始前将RNA提取液于65℃水浴锅中预热,离心管中加入ME(巯基乙醇),(10mL加80ul,50mL中加入300ul)
(2)取约0.8g菌丝体(液体培养获得的菌丝用真空抽滤即可！固体培养就更好说了),在液氮中迅速磨成精细粉末,装入50mL离心管,按1g材料8mL的量加入预热的RNA提取液,颠倒混匀
(3)65℃水浴3-10 min,期间混匀2-3次
(4)加入等体积的酚(注意是酸酚pH4.5)::yi戊醇(25:24:1)抽提(10,000rpm,4℃,5 min)
(5)取上清,等体积的yi戊醇(24:1)抽提(10,000rpm,4℃,5 min)
(6)加入1/4V体积10M LiCl溶液,4℃放置6h以上(或过夜)
(7)10,000rpm,4℃离心20min
(8)弃上清,用500ul SSTE溶解沉淀
(9)酚::yi戊醇(25:24:1)抽提两次,:yi戊醇(24:1)抽提1次(10,000rpm,4℃,5min)
(10)加2V体积的无水乙醇,在-70℃冰箱沉淀30min以上
(11)12,000rpm,4℃离心20 min
(12)弃上清.沉淀用70%酒精漂洗一次,干燥
(13)加200ul的DEPC处理水溶解
(14)用非变性琼脂糖凝胶电泳和紫外分光光度计扫描检测RNA的质量(在抽提过程中,若蛋白质含量或其它的杂质还较多,可以增加抽提次数)
| 产品名称 | Dichlorphenamide-13C6 | 产品货号 | CS-01Y68230 |
| 规格 | 1 mg | CAS号 | 1391054-76-4 |
| 含量 | >99.00% | 分子式 | [13C]6H6Cl2N2O4S2 |
| 分子量 | 311.1 | 用途 | 仅供科研研究使用 |
Dichlorphenamide-13C6规格：1 mg
CAS：1391054-76-4
别名：N/A
化学名：N/A
分子式：[13C]6H6Cl2N2O4S2
分子量：311.1
溶解度：Chloroform: slightly soluble,DMSO: slightly soluble
储存条件：Store at -20°C
General tips：For obtaining a higher solubility , please warm the tube at 37 ℃ and shake it in the ultrasonic bath for a while.
Shipping Condition: Evaluation sample solution : ship with blue ice All other available size: ship with RT , or blue ice upon request
产品描述:
Dichlorphenamide-13C6 is intended for use as an internal standard for the quantification of dichlorphenamide by GC- or LC-MS. Dichlorphenamide is a sulfonamide and an orally bioavailable carbonic anhydrase (CA) inhibitor (Kis = 1.20, 38, 50, and 50 nM for the human CA isoforms CAI, CAII, CAIX, and CAXII, respectively).1 It lowers intraocular pressure in rabbits when 50 µl of a 10% solution is applied topically to the eye.2 Dichlorphenamide rescues the potassium deficiency and prevents insulin-induced paralysis in a rat model of familial hypokalemic periodic paralysis when administered at a dose of 5.6 mg/kg per day for ten days.3 Formulations containing dichlorphenamide have been used in the treatment of glaucoma and primary periodic paralysis.
使用方法:
1. 常用筛选浓度
注意：用来筛选稳转株的工作浓度需要根据细胞类型，培养基，生长条件和细胞代谢率而变化，推荐使用浓度为50-1000μg/mL。对于第一次使用的实验体系建议通过建立杀灭曲线(kill curve)，即剂量反应性曲线，来确定最佳筛选浓度。
一般而言，哺乳动物细胞50-500μg/mL;细菌/植物细胞20-200μg/mL;真菌300-1000μg/mL。
2. 杀灭曲线的建立
注意：为了筛选得到稳定表达目的蛋白的细胞株，需要确定能够杀死未转染宿主细胞的抗生素浓度，可通过建立杀灭曲线(剂量反应曲线)来实现，至少选择5个浓度。
1) 第一天：未转化的细胞按照20-25%的细胞密度铺在合适的培养板上，37℃，CO2培养过夜;注：对于需要更高密度来检测活力的细胞，可增加接种量。
2) 根据细胞类型，设定合适范围内的浓度梯度。以哺乳动物细胞为例，可设定50，100，250，500，750，1000μg/mL。先用去离子水或者PBS buffer按照1:10的比例将母液稀释到5 mg/ml，然后按照下表稀释到相应浓度的工作液。
3) 第二天：替换旧的培养基，换用新鲜配制的含有相应浓度药物的培养基。每个浓度做三个平行孔。
4) 接下来每3-4天更换新的含药物培养基。
5) 按照固定的周期(如每2天)进行活细胞计数来确定阻止未转染细胞生长的恰当浓度。选择在理想的天数(通常是7-10天)内能够杀死绝大多数细胞的浓度为稳定转染细胞筛选用的工作浓度。
3. 稳定转染细胞的筛选
1) 转染48h后，用含有适当浓度的潮霉素B筛选培养基来传代细胞(直接传代或者稀释后传代)。
注意：细胞处于活跃分裂状态时抗生素的杀伤。则当细胞过于稠密，其效率会降低。为了得到较好的筛选效果，最好将细胞稀释至丰度不超过25%
2) 每隔3-4天更换含有药物的筛选培养液。
3) 筛选7天后观察并评估细胞克隆(集落)的形成情况。集落的形成可能还需要一周或者更多的时间，这取决于宿主细胞类型，转染，以及筛选效果。
4) 挑取并转移5-10个抗性克隆于35mm细胞培养板，继续用含药物的筛选培养液维持培养7天。
5) 之后更换正常培养基培养即可。
公司正在出售的产品:
| Recombnant Human GFBP4, N-H | ZDHHC15 Antbody Blockng Peptde |
| RTP4 Antbody Blockng Peptde | 溶血磷脂酸受体蛋白3/EDG7封闭多肽 |
| ARHGAP24 Antbody Blockng Peptde | 激肽释放酶7封闭多肽 |
| ACOT8 Antbody Blockng Peptde | 多聚腺苷酸结合蛋白2封闭多肽 |
| phopho-GFAP (er38) Antbody Blockng Peptde | 血小板活化因子CTR9封闭多肽 |
| CCR6 Antbody Blockng Peptde | 罗丹明标记蛋白A |
| TRANK1 Antbody Blockng Peptde | 雌激素硫酸转移酶封闭多肽 |
| LN9 Antbody Blockng Peptde | 组蛋白H3 K9甲基转移酶封闭多肽 |
| Lamn B2 Antbody Blockng Peptde | 刺激分子B7-1蛋白封闭多肽 |
| ORP4/OBP2 Antbody Blockng Peptde | 整合素αV（CD51）封闭多肽 |
| MM14 Antbody Blockng Peptde | 17号染色体开放阅读框64封闭多肽 |
| HH3R Antbody Blockng Peptde | 叉头蛋白O1封闭多肽 |
| PK3CA Antbody Blockng Peptde | Dichlorphenamide-13C6细胞角蛋白3封闭多肽 |
| PTGER2 Antbody Blockng Peptde | 跨膜蛋白48 |
| 重组人神经元特异性烯醇化酶/γ 烯醇化酶蛋白 | 蛋白质磷酸酶1G封闭多肽 |
蛋白酶抑制剂混合物实验步骤:
(1)实验开始前将RNA提取液于65℃水浴锅中预热,离心管中加入ME(巯基乙醇),(10mL加80ul,50mL中加入300ul)
(2)取约0.8g菌丝体(液体培养获得的菌丝用真空抽滤即可！固体培养就更好说了),在液氮中迅速磨成精细粉末,装入50mL离心管,按1g材料8mL的量加入预热的RNA提取液,颠倒混匀
(3)65℃水浴3-10 min,期间混匀2-3次
(4)加入等体积的酚(注意是酸酚pH4.5)::yi戊醇(25:24:1)抽提(10,000rpm,4℃,5 min)
(5)取上清,等体积的yi戊醇(24:1)抽提(10,000rpm,4℃,5 min)
(6)加入1/4V体积10M LiCl溶液,4℃放置6h以上(或过夜)
(7)10,000rpm,4℃离心20min
(8)弃上清,用500ul SSTE溶解沉淀
(9)酚::yi戊醇(25:24:1)抽提两次,:yi戊醇(24:1)抽提1次(10,000rpm,4℃,5min)
(10)加2V体积的无水乙醇,在-70℃冰箱沉淀30min以上
(11)12,000rpm,4℃离心20 min
(12)弃上清.沉淀用70%酒精漂洗一次,干燥
(13)加200ul的DEPC处理水溶解
(14)用非变性琼脂糖凝胶电泳和紫外分光光度计扫描检测RNA的质量(在抽提过程中,若蛋白质含量或其它的杂质还较多,可以增加抽提次数)
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文献和实验相关实验
Nat Metab：李贵登等团队合作发现肿瘤内酸度维持 T 细胞干性影响肿瘤免疫治疗
录组学、代谢组学以及同位素（13C6-葡萄糖，13C16-棕榈酸）示踪技术发现，长期胞外酸处理能够抑制 mTOR 信号通路及糖酵解途径，促进 T 细胞内的脂肪酸氧化（FAO），增强线粒体适应性, 从而维持「干性样」T 细胞的代谢表征。进一步深入分析以及通过 13C5-甲硫氨酸代谢流实验，作者们发现胞外酸度的升高显著抑制了 T 细胞内的甲硫氨酸摄入及一碳代谢（甲硫氨酸循环）。 机制上，一方面，胞外酸处理通过抑制 MYC 的表达，降低 T 细胞表面甲硫氨酸转运体（SLC7A5）的表达，进而削弱 T 细胞对胞外
15N或15N/13C标记；分子量大于20000的蛋白质，在条件允许的情况下，还可在15N/13C标记的同时进行2H标记，以提高谱图质量。对需要全标记的蛋白质，通常将细菌放在M9培养基里生长，以15NH4Cl为氮源，[13C6]-葡萄糖为碳源。对那些同时还需要2H标记的蛋白质，则还须将培养基里H2O用D2O来代替。若须选取某一种氨基酸残基进行标记，则通常采用营养缺陷型的菌株。另外还有其他许多种可以采用的标记方法，以满足不同实验目的的需要。最近，Nagayama等人将一个很大的蛋白分段
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Dichlorphenamide-13C6
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