多肽合成常见问题（二）

一、能够合成的多肽的最大长度是多少？

我们成功合成了长度为120个氨基酸的多肽。50个氨基酸长度的多肽属于常规合成。

二、什么是原料药（APIs）、目录肽（catalog peptides）、合成肽（custom peptide synthesis）？

原料药（活性药物成分）是医药中具有药物活性的成分，如缩宫素、恩夫韦地等。目录肽是市场上销售的多肽，他们通常以较高的纯度水平批量生产。合成肽通常是根据客户的具体要求定制，如特定序列、修饰、不同纯度、不同长度等要求。公司提供的API肽合成周期为2-3周。

三、什么是固相合成？

氯甲基聚苯乙烯树脂作为不溶性的固相载体，首先将一个氨基被封闭基团保护的氨基酸共价连接在固相载体上。在三 氟  乙 酸的作用下，脱掉氨基的保护基，这样第一个氨基酸就接到了固相载体上了。然后氨基被封闭的第二个氨基酸的羧基通过N,Nˊ-二环己基碳二亚胺（DCC，Dicyclohexylcarbodiimide）活化，羧基被DCC活化的第二个氨基酸再与已接在固相载体的第一个氨基酸的氨基反应形成肽键，形成二肽。重复上述肽键形成反应，使肽链从C端向N端延长，直至达到所需要的肽链长度。

四、什么是树脂和链接剂?

树脂是一种以聚苯乙烯等为基质的聚合物支架，是人工合成的固相介质。不同的树脂有不同的特性。如聚乙二醇在非极性溶剂中膨胀，而聚苯乙烯在极性和非极性溶剂中都膨胀。链接剂是链接树脂支架与基质的中间结构。不同的链接剂，适用于基质中的不同功能团。

五、什么是保护基团？

保护基团是能够结合功能基团并阻断其反应活性的片段。有些是acid-labile保护基团，如Boc和tert-Bu酯类物质。有些是base labile保护基团，如Fmoc和Fm酯类物质。还有一些是fluoride-labile保护基团，如Tmsec和Tmse酯类物质。为确保羧基和氨基间的有效耦合，保护基团应该易于被附加和去保护，且不影响其它肽段。

六、为什么要进行N端乙酰化，C端酰胺化修饰？

化学合成的肽往往携带游离的氨基和游离的羧基。而肽的序列往往代表了母本蛋白的序列，为了与母本蛋白更为接近，肽末端往往需要封闭，即N端乙酰化和C端酰胺化，这些修饰会减少多肽的总电荷，降低多肽的溶解度，也可以使肽模拟它在母本蛋白中α氨基和羧基的原始状态。

如果需要对N端进行乙酰化修饰或对C端进行酰胺化修饰，请在下单时明确。合成一旦结束，则不能再进行修改。

七、荧光标记时，肽和修饰标记的染料之间需要加一个间隔吗？

多数染料属于大分子量芳香族氨基酸，在多肽中引入这一类大型分子，为了避免多肽与标签之间发生相互作用，维持蛋白的构象及其生物学活性，我们推荐引入一个可弯曲的间隔区，比如Ahx, Ahx是一个含有6碳分子的环状结构，可以维持荧光标签的稳定性。否则，FITC很容易结合多肽序列中的半胱氨酸残基或者赖氨酸残基。

通常情况下，生物素、FITC一类的染料既可以标记在蛋白的氨基端也可以标记在蛋白的羧基端。然而，为了在最短时间内，最便捷又高效地合成多肽，我们推荐客户选择标记在氨基端。因为一个多肽的合成往往是从羧基端开始的，这样一来，氨基端的修饰便成为最后一个环节，不需要再进行特别的结合作用。反之，羧基端修饰需要额外的环节，因此过程更加复杂。

八、如何将多肽溶解在DMSO中？

二甲基亚砜（DMSO）是一种含硫有机化合物，分子式为（CH3)2SO，常温下为无色无臭的透明液体。DMSO作为冷冻保护剂经常应用于细胞库。在细胞冷冻过程中，DMSO可防止胞内/胞外晶体的形成，其工作浓度为10%。DMSO通常可与盐或血清白蛋白结合。

疏水性多肽可以很容易地溶解在DMSO中。但DMSO可增加细胞的通透性，若多肽溶解于DMSO中则会对细胞产生毒性作用。高浓度的DMSO绝不可应用于细胞培养中。浓度为5%的DMSO即可让细胞膜溶解。大多数细胞株可以容忍0.5% DMSO，少许可以容忍1%的浓度，而不表现出严重的细胞毒性。然而原代细胞培养对其更敏感。所以如果是用原代细胞做剂量/反应曲线(可行性)，其浓度应低于0.1%。

对于某些疏水性非常高的多肽，可先尝试将其溶解在少量的DMSO(30-50ul,100%)中，然后慢慢(一滴一滴地)将其添加到不断搅拌的水溶液如PBS或其他想要的缓冲液中，直至理想浓度。如果滴加过程中，肽溶液开始变浑浊，说明已经达到了溶解极限。另外，超声波有助于多肽溶解。

经验参考:

对几乎所有的细胞来说，浓度为0.1%DMSO是安全的。

广泛被用于细胞培养的DMSO终浓度为0.5%，不会引起细胞毒性。

虽然对部份细胞来说，1%DMSO也不会产生细胞毒性，但我们推荐0.5%。

也有5%DMSO成功地应用于某些细胞的案例。

始终保持终浓度在0.5%，但储存时可200倍高浓度溶于100%的DMSO中。