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荧光素酶报告基因

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    Luciferase报告基因系统是以荧光素(luciferin)为底物来检测萤火虫荧光素酶(fireflyluciferase)活性的一种报告系统,该技术主要应用于以下三个方向:           1、将待测启动子构建至荧光素酶基因的上游,检测启动子活性;           2、在转染启动子荧光报告基因载体的同时转染转录因子的表达载体,检测转录因子与目标启动子的相互作用;           3、将miRNA靶基因的3’UTR克隆到含双荧光素酶报告基因载体中,并与miRNA过表达载体或mimics共转染到细胞,检测miRNA对靶基因调控作用。 图片 一、需要提供的材料信息 ① 启动子活性分析:基因名称及ID; ② 转录调控:转录因子名称及ID、靶基因名称及ID; ③ miRNA靶基因验证:miRNA名称、物种信息、靶基因名称及ID; 二、最终交付: 1、启动子活性分析:            ① 报告基因载体(启动子不同截断形式);            ② 实验报告(引物设计、载体测序文件、酶活检测)。 2、转录调控:            ① 报告基因载体(野生型、突变型);            ② 转录因子表达载体;            ③ 实验报告(引物设计、载体测序文件、酶活检测)。 3、miRNA靶基因验证:            ① miRNA靶基因结合位点;            ② 报告基因野生型载体、突变型载体;            ③ 实验报告(引物设计、载体测序文件、酶活检测)。

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      在用萤火虫荧光素酶定量基因表达时 ,通常采用第二个报告基因来减少实验的变化因素。但传统的共报告基因(比如CAT,β-Gal,GUS)不够便利。因为各自的测试化学,处理要求,检测特点存在差异。Promega提供一种先进的双报告基因技术,结合了萤火虫荧光素酶测试和海洋腔肠荧光素酶测试。双荧光素酶报告基因测试系统,结合pRL载体系统,表达第二个报告基因海洋腔肠荧光素酶,在单管中进行双荧光素酶报告基因测试,快速,灵敏,简便。系统还提供PLB裂解液,用来裂解在多孔板中培养的哺乳细胞,不需操作单个样品

    • 【求助】一个关于萤火虫荧光素酶报告基因的问题?

      zhqmjeremy 各位战友好。有一个问题,未得其解,恳请帮助。 做荧光素酶报告基因的时候,检测的是细胞因子的启动子。换句话说,是细胞因子的启动子融合的报告基因被转染到细胞内,通过刺进因素作用后,检测启动子的表达情况。这个是背景。 问题是,怎么通过使用内参的方法,去除转染效率不同的孔和细胞之间的差别。 因为,个人认为,细胞数对报告基因的表达量影响比较大。 谢谢。 daidaiyidaidai

    • 【求助】用于检测双荧光素酶报告基因的细胞究竟是应该同时转染两种质粒呢还是只需一个质粒上面同时含两种荧光素酶报告基因?谢谢

      lsdcfhyj 向大家请教关于双荧光素酶报告基因检测系统与单荧光素酶报告基因检测系统的问题,两者的区别我基本清楚了,只是我没弄清楚用于检测的细胞究竟是应该同时转染两种质粒(分别含虫荧光素酶报告基因和海肾荧光素酶报告基因)呢还是只需一个质粒上面同时含两种荧光素酶报告基因?还有一个问题是如果是要转染两种质粒的话,是只需在含虫荧光素酶基因质粒中插入所要检测的调控元件基因,还是两种质粒中的荧光素酶基因前都要插入调控元件?谢谢 msniu

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