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Western Blot是根据抗原抗体的特异性结合检测复杂样品中的某种蛋白质的方法,具有SDS-PAGE的高分辨力和固相免疫测定的高特异性和敏感性,现已成为蛋白质分析的一种常规技术。常用于鉴定某种蛋白质,并能对蛋白质进行定性和半定量分析。
一、需提供的材料信息:
① 细胞:大于10^6;
② 组织:大于100mg,-80℃保存;
③ 实验材料:一抗;
④ 物种信息。
二、交付内容:
① X胶片;
② 电子版图片;
③ 实验报告(实验仪器、试剂、方法、结果、结论)。
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文献和实验zhangyuxianggx 各位western达人,本人在western操作中屡次失败,现有几个问题跟达人们请教一下: 1、我的蛋白是96kDa,选择8%的分离胶有没有问题? 2、配制浓缩胶我用的是0.5M Tris-HCL(PH=6.8),但是看到好多配方用的都是1.0MTris-HCL(PH=6.8),这个有没有什么影响? 3、转膜是用的300mA,40min,看着转膜后胶很干净,就一直用的这个电流和时间。但是最后膜上总是很乱,背景
Western blot 实验技巧精要 ——轻松获得高质量 western blot 条带图 Western blot 方法在 SCI 文章中出现的频率非常高,漂亮的 WB 电泳图可以给文章增色不少。但是 WB 实验的步骤琐碎,细节颇多,要想得到令人满意的结果还是需要花费很多时间和精力去摸索实验技巧的。 小编经过了一段时间的努力,已经可以比较轻松的实现用 WB 方法对磷酸化蛋白计算药物的 IC50 值(见下图)。 接下来,小编将结合自己的经验以及网上可以搜索
WB 作为传统的实验技术,在实验室中得到了广泛的应用。 讲座从 WB 的基础原理、实验流程及常见问题和解决方法等方面对此项技术进行全面的介绍,结合具体实验案例,深入浅出的对 WB 技术进行解析,无论实验新手还是富有经验的操作者,都可以从讲座中获得所需的知识,用于获得更为完美的 WB 实验结果。
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