动物造模丨基质层注射法真菌性角膜炎动物模型

基质层注射法真菌性角膜炎动物模型

真菌性角膜炎（fungal keratitis，FK）也叫角膜真菌病（keratomycosis），它是由真菌感染引起的一种严重威胁视力的眼部化脓性疾病，常发生于植物性角膜外伤后。近年来，其发病率在我国明显升高，该病预后差，可引起角膜浑浊、溶解甚至穿孔，不仅可严重损害患者视力，还可导致眼球丧失。

一、原理：

真菌性角膜炎建模方法很多，目前常用的有：角膜基质注射法、角膜接触镜法、针刺法、感染角膜植片法、角膜划痕法和准分子激光角膜上皮磨镶术法等。

其原理均不外乎先造成模型角膜表层的损伤，再将培养的真菌接种于损伤部位，造成真菌性角膜炎模型。

二、材料与仪器：

实验对象：家兔。

实验器材：开睑器、注射器、裂隙灯显微镜。

实验试剂：

① 丁卡因滴眼液；② 地塞米松注射液；

③ 吉姆萨染色液；④ HE 染色液；

⑤ PAS 染色液。

三、实验步骤：

基质层注射法真菌性角膜炎模型的基本过程可分为如下几步：

A. 速眠新 1 ml/kg 肌内注射全麻家兔，同时丁卡因滴眼 3 次局麻，开睑器开睑，用角膜基质注射器角膜基质层间注射 10 μl 茄病镰刀菌菌液（1.5 x 106 CFU/ml），同时结膜下注射 10 μl 地塞米松注射液，术毕眼内涂妥布霉素眼膏。

B. 检测指标：

接种后 2 天，角膜刮片真菌培养并吉姆萨染色致病菌形态学观察。每天裂隙灯眼前节检查，并分别在接种后第 1、2、6、8、14、20 和 30 天做角膜溃疡等级评分。

C. 第 30 天处死家兔，取角膜片，HE 染色，光镜下观察组织病理学变化；PAS 染色，观察角膜基质层真菌菌丝。

四、注意事项

接种后 2 天，角膜刮片真菌培养可见典型茄病镰刀菌菌落，呈棉花状，早期为白色，最终呈粉红色，刮片菌丝发现率 100%。吉姆萨染色可见镰刀菌菌丝成 90°出芽生长。KOH 涂片可见成熟孢子呈典型镰刀形散布。

在接种后第 3 天，可见角膜全层水肿，溃疡，干燥致密，粗糙不平，局部隆起并有典型菌落生长。

接种后 8 天，溃疡面积进一步扩大，感染达到最高峰. 角膜缘有新生血管长入。

接种后第 15 天，溃疡面积不再扩大，并有逐渐缩小的趋势，溃疡周围被大量新生血管包绕。

接种后 30 天，角膜白斑形成，白斑周围无浸润，边界清，角膜周围有新生血管。

HE 染色可见角膜溃疡处上皮浅基质层缺损，周边组织水肿，角膜基质纤维组织排列素乱，角膜基质层中可见少量中性粒细胞，基质层内可见较多新生血管。

PAS 染色显示真菌菌丝于角膜基质层内，呈平行生长。