LabFD 内切酶 SgeI

产品货号：F1501S

储存条件：-20℃

SgeI 可识别与切割含有 5-mC 位点的 DNA 靶标序列，一条链或双链甲基化均可被识别。

产品组成

组分	规格
LabFD™ Sgel	50ul
10×LabFD™ Buffer	1ml
10×LabFD™ Color Buffer	1ml

 

产品简介

LabFD™快速内切酶是一系列经过基因工程重组、能够在 5~15 分钟内精确完成 DNA 切割的高保真限制性内切酶，适用于质粒DNA、PCR 产物或基因组DNA 等的快速酶切。LabFD™快速内切酶具有如下特点：5~15 分钟内即可完成酶切；共用一种酶切Buffer，大大简化酶切反应体系；良好的酶活冗余度， 轻松应对底物过量或困难模板酶切。此外，LABLEAD去磷酸化、连接试剂在 LabFD™酶切 Buffer 中具有100%活性，支持一管化反应，提升“酶切-修饰-连接”的体验。

酶活定义

在 1×SgeI Buffer 条件下，1μg pUC19-SgeI DNA (Dcm+) 在50μl 反应体系中37℃孵育1 h，不断增加酶量，直至酶切产物DNA带型不随着酶量的增加而发生变化，此时酶量定义为1 U。

质量控制

核酸内切酶残留检测

将 3U Sgel 与超螺旋质粒 DNA 在 37℃温育 4 h，通过DNA电泳检测质粒无变化。

核酸外切酶残留检测

将 5U Sgel 与双链 DNA 底物在 37℃温育 1 h，通过 DNA 电泳检测双链DNA 底物无变化。

注意事项

1. 底物至少需要 2 个 SgeI 识别序列才能有效酶切。

2. 甲基化 DNA 完全酶切取决于 SgeI 的识别位点的数量，另外由于识别位点酶切产生的DNA产物会促进SgeI

的非特异性酶切，因此建议酶切时优化SgeI酶量用于酶切反应。

使用方法

  1. DNA 酶切流程

① 在冰上按如下建议的加样顺序配制反应体系：

	质粒 DNA	PCR 产物	基因组 DNA
ddH2O	15ul	16ul	30ul
10×LabFD™ Buffer 或 10×LabFD™ Color Buffer	2ul	3ula	5ul
底物 DNA	2ul(up to 1ug)	10ul(~0.2ug)	10ul(5ug)
LabFD™ SgeI	1ul	1ul	5ul
Total	20ul	30ul	50ul

注：反应体系可以按比例放大或缩小。反应时间不建议超过 1 h。

② 轻柔吸打或轻弹管壁以混匀（切勿涡旋），然后瞬时离心以收集挂壁液滴；

③ 37℃温育1 h；

④ 80℃温育 20 min即可使酶失活，停止反应（可选）。

   2.双酶切或多酶切

每种快速内切酶的用量为 1ul，并根据需要适当扩大反应体系；

所有快速内切酶的体积总和不得超过总反应体系的 1/10；

如果所用的几种快速内切酶的最适反应温度不同，应先以最适温度低的酶开始酶切，再添加最适温度较高的酶，在其最适反应温度下进行酶切反应。

3.适用于质粒的扩大反应体系

注：如果总反应体系大于 20ul，应适当增加温育时间，尽量使用水浴、金属浴或沙浴。

DNA	1ug	2ug	3ug	4ug	5ug
LabFDTM Sgel	1ul	2ul	3ul	4ul	5ul
10×LabFD™ Buffer 或 10×LabFD™ Color Buffer	2ul	2ul	3ul	4ul	5ul
Total	20ul	20ul	30ul	40ul	50ul

甲基化修饰影响

Dam	Dcm	CpG	EcoKI	EcoBI
无影响	总是切割被 Dcm甲基转移酶甲基化的DNA	切割与 CpG 甲基化序列重叠的靶点	无影响	无影响