LabFD 内切酶 BspQI

同裂酶：SapI, LguI, PciSI；（注： 同裂酶对于不同的甲基化修饰可能具有不同敏感性。）

产品组成

组分	规格
BspQI (10U/ul)	50ul
10× HN Buffer	1ml

产品简介

BspQI 属于 Type IIS 型限制酶，识别非回文序列，并在识别序列之外进行切割，常用于 Golden Gate 组装。经过优化的反应 Buffer

使 BspQI 最大限度发挥功能，同时反应缓冲液包含重组白蛋白，其可增强多种酶的稳定性。

建议反应条件

1× HN 缓冲液；50℃温育；参照“DNA 酶切流程”配制反应体系。

失活条件

80℃温育 20 min。

活性定义

1 活性单位 (U) 是指在 50 μl 反应体系中，50℃ 1 h 内完全酶切1 µg λDNA 所需的酶量

质量控制

超长时间温育检测

最适反应温度下，将 10 U BspQI 与 1 μg λDNA 共同温育 3 h，未检测到其他核酸酶污染或星号活性引起的底物非特异性降解，延时

酶切可能出现星号活性。

酶切-连接-再酶切检测

最适反应温度下，使用 10 U BspQI 消化底物，回收酶切产物。在 22℃下使用适量 T4 DNA Ligase (Fast) 可以将酶切产物重新连接。

将连接产物再次回收后，使用相同的内切酶可以重新切开连接产物。

DNase 残留检测

将 10 U BspQI 与双链 DNA 底物在 37℃温育 16 h，通过 DNA 电泳检测双链 DNA 底物无变化。

使用方法

1.DNA 快速酶切流程

（1）在冰上按如下建议的加样顺序配制反应体系：

ddH2O	up to 50ul
10× HN Buffer	5ul
底物 DNA	1ug
BspQI (10 U/μl)	1ul
Total	50ul

 a. DNA 底物中应不含苯酚、氯仿、乙醇、EDTA、洗涤剂或高浓度盐，否则将会影响 BspQI 酶活性；

（2）轻柔吸打或轻弹管壁以混匀（切勿涡旋），然后瞬时离心以收集挂壁液滴；

（3）50℃温育 50min-1h；

（4）80℃温育 20min 即可使酶失活，或者通过吸附柱或苯酚 / 氯仿纯化终止反应。

 2.注意事项

① 反应体系中加入的酶体积不应超过总体积的 10%，避免酶中过多的甘油引起星号活性；

② 限制性内切酶存储缓冲液中的添加剂 ( 例如甘油、盐 ) 与底物溶液中的污染物 ( 例如盐、EDTA 或乙醇等 ) 相同，反应体积越小，酶切反应抑制效应越强。

 

不同 DNA 中的酶切位点数量

λDNA	ΦX174	pBR322	pUC57	pUC18/19	SV40	M13mp18/19	Adeno2
10	1	1	1	1	0	0	7

甲基化修饰影响

Dam	Dcm	CpG	EcoKI	EcoBI
无影响	无影响	无影响	无影响	无影响