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- 2026年04月30日
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多靶点标记技术旨在同一张切片上同时检测多个靶标分子，从而进行不同靶标之间共表达和共定位分析、丰度检测、异质性分析、细胞表型统计以及复杂的组织微环境描述等。
该技术是基于TSA（Tyramide Signal Amplification ）酪胺信号放大技术的组织切片多重标记方案，利用辣根过氧化酶（HRP）对靶蛋白或核酸进行高密度原位标记，提高检测的灵敏度，大幅提高信噪比甚至达千倍以上。它可使用同一动物来源的一抗，进行同一组织切片上多种marker的荧光多重标记。同时由于具有优秀的信号放大性能，它可将信号强度完成10-100倍的信号提升，大大提高对于弱信号及不易标记的蛋白的探测灵敏度。
多标记技术以迭代染色的方式进行多色复染，期间用微波法去除上一轮染色的一抗及二抗从而避免抗体间信号串扰。由于TSA与抗原为共价键结合而保留，一抗二抗与抗原为非共价键结合而被微波打断，所以多标记方案在保证上一轮染色信号不丢失的前提下，彻底去除上一轮抗体，从而形成TSA对于抗原的直接标记。使用该染色技术，配合光谱成像技术和专业定量分析软件可将组织内蕴含的丰富信息良好的挖掘呈现。目前可以实现在组织切片上完成了多达9色的多重标记实验。
优势：
1.同一张组织切片上实现多达9种染色；
2.摆脱一抗种属来源束缚，实现抗体自由选择；
3.组织原位类流式分析；
4.单一细胞多重表达标记实现组织原位观察；
5.增强抗体灵敏度达1000倍。
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文献和实验Nature Medicine 再论多重免疫荧光揭示预测性生物标志物，用于优化免疫治疗临床试验设计
的队列的缓解率和 PFS 均显著高于 PEMBROSARC 研究的先前所有患者队列（分别为 30% 对 2% 和 4.9 对 1.5 个月）。这些结果与此前对 SARC028 研究中肿瘤样本的回顾性分析结果一致，表明晚期软组织肉瘤（STS） 中 TLS 的存在是一种潜在的预测生物标志物，可改善患者对派姆单抗治疗的选择。 在PEMBROSARC 研究的临床试验设计中，研究者基于600 多个 STS样本的转录组数据定义了一个“高免疫”的肉瘤亚组，并使用多色免疫荧光验证样本中的肿瘤内 TLSs的组织特征
8 色多重荧光免疫组化方法揭示补体在早期类风湿关节炎发展中的作用
炎和组织损伤的发展中发挥作用。图 3. 七 种补体蛋白的早期 RA 滑膜活检样本的H&E、免疫组织化学 (IHC) 染色结果，黑色箭头表示每种补体蛋白的阳性棕色染色。 图 4. 早期 RA 患者滑膜活检样本中补体蛋白阳性细胞定量分析 为了进一步证实补体基因及其各自蛋白质表达之间的相互关系，对早期 RA 患者滑膜活检样本中的 C3c、CFHR4、CFB、CFH、FCN3、MBL2 和 C5b-9 (MAC)，七种补体蛋白进行多重荧光免疫组化染色（mIHC），并对这些蛋白的整体分布及相互关系进行
Nature Cancer I 生物标志物多参数评估mTLS预测实体瘤免疫治疗效果
试剂、Ventana 自动染色仪、Vectra Polaris 多光谱成像仪、InForm 光谱拆分及组织病理定量分析软件为主要研究方法, 获得了以下主要结果：I 较高密度的 TLS 的高密度与 CD8+ T 淋巴细胞肿瘤浸润密度相关，是细胞杀伤性免疫反应激活的特征。I B 细胞和 TLS 的成熟可预测接受免疫检查点抑制剂治疗的患者的预后。I 泛肿瘤/“肿瘤不可知”生物标志物：TLS 在 11 种不同肿瘤类型中的存在与 PDL-1 轴阻断功效相关。 同时使用双色免疫组化和 Opal 多重免疫荧光染色方案，证实
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