多色标记免疫荧光-多重组织成像技术

多靶点标记技术旨在同一张切片上同时检测多个靶标分子，从而进行不同靶标之间共表达和共定位分析、丰度检测、异质性分析、细胞表型统计以及复杂的组织微环境描述等。

该技术是基于TSA（Tyramide Signal Amplification ）酪胺信号放大技术的组织切片多重标记方案，利用辣根过氧化酶（HRP）对靶蛋白或核酸进行高密度原位标记，提高检测的灵敏度，大幅提高信噪比甚至达千倍以上。它可使用同一动物来源的一抗，进行同一组织切片上多种marker的荧光多重标记。同时由于具有优秀的信号放大性能，它可将信号强度完成10-100倍的信号提升，大大提高对于弱信号及不易标记的蛋白的探测灵敏度。

多标记技术以迭代染色的方式进行多色复染，期间用微波法去除上一轮染色的一抗及二抗从而避免抗体间信号串扰。由于TSA与抗原为共价键结合而保留，一抗二抗与抗原为非共价键结合而被微波打断，所以多标记方案在保证上一轮染色信号不丢失的前提下，彻底去除上一轮抗体，从而形成TSA对于抗原的直接标记。使用该染色技术，配合光谱成像技术和专业定量分析软件可将组织内蕴含的丰富信息良好的挖掘呈现。目前可以实现在组织切片上完成了多达9色的多重标记实验。

优势：

1.同一张组织切片上实现多达9种染色；

2.摆脱一抗种属来源束缚，实现抗体自由选择；

3.组织原位类流式分析；

4.单一细胞多重表达标记实现组织原位观察；

5.增强抗体灵敏度达1000倍。