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    (一)长链非编码RNA全长克隆

    长链非编码RNA(lncRNA)是一类转录本长度超过200nt的RNA分子,它们并不编码蛋白,而是以RNA的形式在多种层面上(表观遗传调控、转录调控以及转录后调控等)调控基因的表达水平。

    目前数据库中许多长链非编码RNA存在非全长或两端数据不准确的情况,无法开展下游相关实验。科沿有道在长链非编码RNA(lncRNA)全长克隆方面积累了丰富的实战经验,保证克隆序列的完整性,为下游实验提供准确可靠的实验数据。

    (二)microRNA 靶基因验证实验(RLM-RACE)

    采用invitorgen 公司FirstChoice® RLM-RACE Kit试剂盒,通过5’ RLM-RACE实验,来完成microRNA与靶基因之间切割关系的验证,准确找到切割位点,是研究microRNA相关科研项目的必要实验科目。

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    (三)普通基因RACE

    本实验采用RACE试剂盒,保证待克隆基因的完整性和准确性,普通基因序列RACE克隆只需15-20个工作日。

    (四)实验说明

    1) 提取Total RNA的材料要新鲜,需采样后立即放入液氮中速冻或加入样品稳定剂。

    2) Total RNA无降解,OD260/280=1.8 ~ 2.0。

    3) 提供尽量多的实验材料:3′ RACE Total RNA>15 μg;5′RACE Total RNA>25 μg。如果基因的含量较低或者未知序列较长,样品量需相应增加。

    4) 当验证表明样品中基因含量低时,双方沟通决定下一步实验使用的方法。

    5)由于mRNA存在个体和组织差异或基因的序列特殊,RACE的PCR产物测序有时会有个别碱基是套峰或测不通的情况,对未测通部分可继续进行克隆测序,最终提供两个质粒的测序结果,碱基的准确性由客户自行判断。

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